淺談ws銀染法的應(yīng)用

1、淺談Warthin–Starry銀染法的應(yīng)用,,Background,W-S法首先在1920年由Warthin和Starry 作為顯示螺旋體的一種特殊染色方法提出, 其原理是一種嗜銀反應(yīng)。W-S法除可顯示螺旋體外還可顯示放線菌、貓抓病球桿菌、塵埃顆粒、胃幽門螺桿菌、黑色素顆粒、真菌、球菌及神經(jīng)纖維等。,Warthin AS, Chronister AC (1920). "A more rapid and improved m

2、ethod of demonstrating spirochetes in tissues (Warthin and Starry’s cover-glass method)". American Journal of Syphilis 4: 97–103.,Introduction,The Warthin–Starry stain (WS) is a silver nitrate-based staining method

3、(a silver stain) used in histology. It was first introduced in 1920 by American pathologists Aldred Scott Warthin (1866-1931) and Allen Chronister Starry (1890-1973), for the detection of spirochetes. It has been consi

4、dered the best stain for detection of spirochetes, and is also used to stain Helicobacter pylori, Lawsonia intracellularis, Microsporidia, and particulates.,W–S法在Hp感染診斷中的應(yīng)用,Fig 1A. Helicobacter pylori colonized on the su

5、rface of regenerative epithelium, stained with the Warthin-Starry method;Fig 1B. Clusters of bacteria (arrow) shown on Warthin–Starry stain.,1A,Warthin–Starry銀染法的應(yīng)用,傳統(tǒng)的Warthin-starry染色法,傳統(tǒng)的Warthin-starry染色法是用1 g硝酸銀加100

6、ml酸化水配制成1%硝酸銀染液。該方法顯色時(shí)間長(zhǎng), 染色效果差, 幽門螺桿菌檢出率低, 且呈現(xiàn)灰色, 不易被病理醫(yī)師所辨識(shí),易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。另一方面, 如果加熱時(shí)控制不好, 溫度過(guò)高, 會(huì)導(dǎo)致切片中標(biāo)本呈現(xiàn)干枯狀, 染色出現(xiàn)非特異的結(jié)果。,改良Warthin-starry染色法,因胃鏡活檢標(biāo)本病理診斷的需要, 北京大學(xué)第三醫(yī)院消化科病理室自1988 年以來(lái)，以Warthin-Starry 銀染法為基礎(chǔ)加以改進(jìn)，開(kāi)展Hp 銀鹽染色技術(shù)

7、。該法改進(jìn)后的20 余年, 制片數(shù)十萬(wàn)張, 至今組織仍著色牢固穩(wěn)定。,韓亞京. 幽門螺桿菌銀鹽染色方法改進(jìn)[J]. 北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1998,05:86.,不同之處,使用此改進(jìn)法和Warthin-Starry 方法的不同之處主要為試劑配制簡(jiǎn)便組織著色牢固穩(wěn)定, 成本低廉。兩方法不同之處為:試劑配制簡(jiǎn)化, 僅為雙蒸水。而W-S 法為醋酸鹽緩沖液, 其改良法為檸檬酸鹽緩沖液；所用玻璃器皿、載物片等預(yù)先行化學(xué)潔凈處理, 活性銀還原范圍局

8、限, 切片銀污染程度較小, 觀察對(duì)比清晰；本法可使用立式玻璃染缸成批集中染色(每缸8～11 張), 提高制片效率。,優(yōu)點(diǎn),經(jīng)改進(jìn)后的改良Warthin-starry染色法顯色時(shí)間明顯縮短, 染色效果易于控制, 幽門螺桿菌呈現(xiàn)黑色, 易于辨識(shí), 檢出率明顯提高。其次, 通過(guò)銀染法與改良染色法結(jié)果的比較可以看出, 兩種染色方法對(duì)于幽門螺桿菌的檢出率是相同的, 而且改良Warthin-starry染色法診斷可靠, 不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性的染色結(jié)果。

9、,應(yīng)用價(jià)值,改良Warthin-starry染色法是一種較為經(jīng)濟(jì)實(shí)用的染色法, 它有著試劑配制簡(jiǎn)便, 診斷準(zhǔn)確迅速等特點(diǎn), 在一般的實(shí)驗(yàn)室即可得到廣泛的開(kāi)展, 在幽門螺桿菌的檢測(cè)中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和很高的應(yīng)用價(jià)值。,圖2 應(yīng)用改良W-S 法可見(jiàn)胃粘膜腺體陷窩內(nèi)可見(jiàn)簇狀或片狀的幽門螺桿菌,超聲波改良W-S 染色法,南京軍區(qū)南京總醫(yī)院病理科孟奎，馬恒輝，周曉軍等提出一種更加快捷的Warthin-starry 染色方法。他們利用超聲波高速振

10、蕩的原理, 在70 ℃水浴加溫下, 促進(jìn)銀溶液中的離子加速運(yùn)動(dòng), 從而促使胃幽門螺桿菌快速有效地結(jié)合銀離子, 加速顯色，結(jié)果可靠，快速方便。,孟奎,馬恒輝,周曉軍等.一種快捷的 Warthin- Starry染色方法[J].中華消化內(nèi)鏡雜志,2002,19(1):55.,圖3 應(yīng)用改良W-S 法可見(jiàn)胃粘膜粘液下可見(jiàn)簇狀或片狀的幽門螺桿菌,總結(jié),W-S染色是一種較傳統(tǒng)的特殊染色方法, 盡管其染色時(shí)間較長(zhǎng), 染色條件較嚴(yán)格, 在某些應(yīng)用領(lǐng)

11、域也出現(xiàn)了替代手段, 但作為一種能直觀查見(jiàn)病原體的敏感且特異的檢測(cè)方法, W-S染色在病理診斷中仍發(fā)揮著重要作用, 其操作所需設(shè)備簡(jiǎn)單, 便于各級(jí)醫(yī)院開(kāi)展使用。,王雷明,于文娟,鐘延豐. 改良銀染法在病理診斷中的應(yīng)用[J]. 診斷病理學(xué)雜志,2012,03:231-232.,Conclusion,W-S銀染法是組織切片染色法中效果最好的一種，檢出率較高，為侵入性取材方式下診斷Hp感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但是傳統(tǒng)方法操作較繁瑣．技術(shù)要求高，且