簡介：1研究目的和背景種子細胞是組織工程化組織、器官構建干細胞移植的基礎和關鍵環(huán)節(jié)。心血管領域目前研究應用的種子細胞以胚胎干細胞ESC和骨髓間充質干細胞BMSC為主但前者誘導分化條件復雜、易于成瘤后者屬于成體干細胞的范疇壽命有限、活力較差；且作為自體來源的細胞BMSC必須在發(fā)現病例后才可進行繁瑣的體外細胞培養(yǎng)、擴增其時效性和有限的生長潛能限制了臨床的廣泛應用。此外已有的研究均表明上述兩種細胞誘導分化為心血管細胞的比率較低因此都不是理想的種子細胞。尋找適宜的種子細胞是開展心血管組織工程、和干細胞移植治療心血管疾患必須解決的首要問題。從理論上推測胚胎心臟干祖細胞發(fā)育時序上更接近心臟的組織細胞且具有較強的分化增殖能力因而誘導分化為心臟的組織細胞更容易。近來研究較多的心臟干祖細胞主要有三種來源分別是早期胚胎心臟或心管、成體心臟、ESC所形成類胚體中的心臟原基。后兩者來源的心臟干祖細胞其分離培養(yǎng)和生物學特性的研究已有較多報道而從早期胚胎心管分離培養(yǎng)的心臟干祖細胞生物學特性的研究目前則尚未見報道。從心臟發(fā)育的角度粗略講早期胚胎心管中存在心肌源性祖細胞和心內膜源性的祖細胞前者構成了心臟的絕大部分最終形成各種類型的心肌細胞和傳導細胞；后者在心臟中只占很小一部分最終分化形成心內膜、瓣膜、隔膜等組織。本課題擬對胚胎心臟祖細胞的生物學特性進行深入研究以便為心臟組織工程、細胞移植治療心肌梗死、生物心臟起搏器的構建等研究尋找一種理想的新型種子細胞。2材料和方法21人胚胎心臟祖細胞的生物學特性211細胞培養(yǎng)和鑒定2111胚胎心臟祖細胞的培養(yǎng)取4周胚齡的藥物流產人胚胎在解剖顯微鏡下分離心管將心管在025％胰酶中消化分散為單細胞懸液；上述得到的單細胞懸液離心并去上清使用含15％胎牛血清、0375％碳酸氫鈉、10UGLVEGF、106ULLIF、106UL青霉素、106UL鏈霉素、2MMOLL谷安酰氨的高糖DMEM培養(yǎng)液重懸；將重懸的單細胞懸液接種于六孔細胞培養(yǎng)板或者十二孔細胞培養(yǎng)板細胞長滿后進行傳代擴增。2112胚胎心臟祖細胞的鑒定人胚胎心臟祖細胞的鑒定包括①形態(tài)學的觀察；②采用免疫熒光的方法檢測NKX25、IS11分子標志物的表達③采用免疫細胞化學的方法檢測平滑肌肌動蛋白、細胞角蛋白、VⅢ因子CKIT的表達；④RTPCR檢測GATA4心臟特異轉錄因子的表達。212胚胎心臟祖細胞的生物學特性2121胚胎心臟祖細胞的基本生物學特性通過倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察培養(yǎng)細胞的形態(tài)學特征；通過生長曲線和分裂指數曲線的繪制檢測細胞的生長特性。2122胚胎心臟祖細胞的分化特性21221向心肌細胞的誘導分化利用5氮胞苷誘導第15代胚胎心臟祖細胞向心肌細胞的分化分別在誘導前、誘導后10天、15天三個時相RTPCR檢測心肌源性特異基因GATA4、ΑMHC的表達免疫熒光細胞化學的方法檢測心肌肌動蛋白的表達倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的改變WESTERNBLOT的方法檢測誘導前后細胞心肌肌動蛋白的表達。21222向平滑肌細胞的誘導分化與家犬血管內皮細胞共培養(yǎng)誘導胚胎心臟祖細胞向平滑肌細胞方向分化對誘導前后的細胞免疫熒光檢測ΑSMA和MHCSM的表達WESTEMBLOT的方法檢測誘導前后細胞ΑSMA的表達。22胚胎心臟祖細胞向心臟起搏細胞的誘導分化221大鼠胚胎心臟祖細胞的培養(yǎng)250G雌雄SD大鼠配對合籠喂養(yǎng)第二天觀察糞盤是否有陰栓確定雌鼠受孕開始時間；于受孕后105天斷頸處死母鼠取出子宮在無菌PBS中洗滌用鑷子撕開子宮和羊膜分離得到心管；將心管在025％胰酶中消化分散為單細胞懸液后采用與人胚胎心臟祖細胞相同的操作接種、培養(yǎng)、傳代擴增大鼠胚胎心臟祖細胞。222大鼠胚胎心臟祖細胞的鑒定大鼠胚胎心臟祖細胞的鑒定包括①形態(tài)學的觀察鑒定；②采用免疫熒光的方法檢測原代、第5代、第20代細胞NKX25分子標志物的表達；③采用免疫熒光的方法檢測原代、第5代、第20代細胞OCT4分子標志物的表達；④采用免疫熒光的方法檢測原代、第5代、第20代細胞階段特異性胚胎抗原SSEA4分子的表達。223大鼠胚胎心臟祖細胞向起搏細胞的誘導分化胚胎心臟祖細胞接種培養(yǎng)兩天后更換培養(yǎng)基為含有內皮素1的DMEM送孵箱進行誘導培養(yǎng)三天后換回正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)倒置相差顯微鏡下觀察細胞的搏動情況并錄像。誘導前后的細胞通過免疫熒光的方法檢測HCN2、HCN4、CONNEXIN43、CONNEXIN45、心肌肌動蛋白、NKX25、OCT4的表達通過HE染色和電鏡觀察檢測其形態(tài)結構的改變通過膜片鉗技術檢測其電生理情況。3結果在本研究中胚胎心臟祖細胞經內皮素1誘導五天后光鏡下直接觀察或HE染色觀察其基本形狀與誘導前相比無明顯改變；但透射電鏡觀察超微結構證實誘導后細胞有了較為明顯的分化；證據之一是誘導后出現較誘導前為多的簡單細胞器結構包括少量的線粒體、尚不發(fā)達的高爾基體和較不完整的肌絲樣結構證據之二是誘導后細胞之間可見有連接樣的結構增多。這一超微結構上的變化在免疫熒光染色上得到了進一步的證實心肌肌動蛋白細肌絲的主要組成成分的染色在誘導前后由陰性變?yōu)榱岁栃钥p隙連接蛋白43和45在誘導后也出現了多量的表達。肌動蛋白的表達或肌絲樣結構的出現是誘導后細胞搏動更為明顯的結構基礎而縫隙連接蛋白的表達則表明誘導后細胞之間更易建立肌電偶聯(lián)?？傊珓忧闆r和形態(tài)結構上的變化為誘導后細胞已經向起搏細胞方向發(fā)生轉變給出了初步的證據。起搏細胞之所以具有自動興奮性是由于在動作電位四期激活產生一種稱為IF的內向離子流導致了細胞的自動除極。編碼IF離子流的通道分子稱為超級化激活的環(huán)核苷酸門控的離子通道HYPERPOLARIZATIONACTIVATEDCYCLICNUCLEOTIDEGATEDCHANNELHCN由于HCN與心臟起搏的產生和調節(jié)關系密切所以被稱為起搏基因。在本研究中我們通過免疫熒光染色和RTPCR檢測了誘導后細胞起搏基因HCN2和HCN4的表達結果證明了誘導后細胞存在上述兩種起搏離子通道具備了起搏細胞產生自動興奮的結構基礎。進一步我們利用單細胞膜片鉗實驗檢測誘導后胚胎心臟祖細胞的電生理情況顯示誘導后細胞出現了連續(xù)的自發(fā)性動作電位竇房結樣起搏動作電位和心房肌樣起搏動作電位這一結果最終證明了誘導后細胞可以自發(fā)產生起搏動作電位自動興奮性具備了起搏細胞最基本的電生理特征。結論人早期胚胎心管來源的心臟祖細胞具有幼稚型的細胞結構和旺盛的生長特性誘導分化為心肌樣細胞和平滑肌樣細胞的誘導率高、誘導分化條件簡單是心血管組織工程和干細胞移植研究較理想的種子細胞。大鼠胚胎心管來源的胚胎心臟祖細胞易于分離、培養(yǎng)、擴增利用內皮素1可將其誘導成為具有穩(wěn)定起搏活性的心臟起搏細胞是生物心臟起搏器構建較理想的細胞來源。

簡介：研究生個人簡介姓名顏丙超性別男年齡29學習及工作經歷時間單位及職務200907畢業(yè)于濟寧醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)，獲醫(yī)學學士學位201009～201307徐州醫(yī)學院攻讀神經外科碩士學位研究生期間臨床、科研成果及獲獎情況時間項目2010年通過國家執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格考試20112012年臨床培訓12個月，通過CET62013年研究生期間修滿32學分，核心期刊發(fā)表文章一篇徐州醫(yī)學院碩士學位論文縮略詞心BC口CCK8CDNADDH20DMSOFBSHMGA2HSMABNCODOEPLAGEPBSPMSFSDSTEM匣DWB縮略詞表ABBREVIATIONALKALINEPHOSPHATASE5BROMO4CHLORO3INDOLYLPHOSPHATECELLCOUNTINGKIT8COMPLEMENTARYDNADOUBLEDISTILLEDWATERDIMETHYLSULFOXIDEFATALBOVINESERUMM曲MOBILITYGROUPA2HORSESERUM中文全稱堿性磷酸酶5溴_4氯3吲哚磷酸細胞增殖毒性檢測法互補脫氧核糖核苷酸雙蒸水二甲基亞砜胎牛血清高遷移族率蛋白A2馬血清MONOELONALANTIBODY單克隆抗體NITROCELLULOSEOPTICALDENSITYOVEREXPRESSIONPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFFERSALINEPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDESODIUMDODECYLSULFATETETRAMETHYLETHYLENEDIAMINEWESTERNBLOTTING醋酸纖維素光密度值過表達聚丙烯酰胺凝膠電泳磷酸鹽生理鹽水緩沖液苯甲基磺酰氟十二烷基硫酸鈉四甲基乙二胺免疫印跡

簡介：中山大學博士后學位論文血中不同轉移潛能肝癌細胞生物學特性及其基因差異表達姓名張剛慶申請學位級別博士后專業(yè)外科學普通外科指導教師陳規(guī)劃20080510中文摘要只能間接推斷血液中存在轉移癌細胞，不能進一步研究判斷血液中轉移癌細胞的生物學特性。免疫磁珠IMMUNOMAGNETICBEAD，IMB技術是近年來發(fā)展起來的一項新的免疫學技術，其基本原理在于用單克隆抗體與磁性微珠結合，在磁場作用下，使與免疫磁珠特異性相連的細胞分離開來，簡便易行、分離純度高、同時保留細胞活性的優(yōu)點。利用免疫磁珠細胞分離技術檢測腫瘤患者外周血液或骨髓中的轉移癌細胞，它能在100萬個單核細胞中分離檢測出一個腫瘤細胞，其敏感性與RTPCR方法相同，假陽性率卻比RTPCT明顯降低。TAUBERT等成功地從乳腺癌患者外周血中分離出轉移的乳腺癌細胞，ZIGEUNER在分離LO‘個單位單核細胞中懸浮一個腫瘤細胞的研究中，對免疫磁珠細胞分離技術與其它免疫細胞化學方法進行了比較，后者的檢出率為23％，而免疫磁珠技術的檢出率可達933％，同時分離純化后的癌細胞活性高，達85％以上。WAGUNI等運用該技術富集血中肝癌細胞，結果顯示，可在每2ML血中檢測出110個肝癌細胞，在55例肝細胞癌患者中，29例53％可檢測出循環(huán)肝癌。血液中循環(huán)腫瘤細胞分離富集后進行培養(yǎng)，可使其異質性減至最低，轉移能力表達穩(wěn)定，有利于比較研究循環(huán)腫瘤細胞的生物學特性，深入了解腫瘤血液轉移的機制。隨著腫瘤的發(fā)生發(fā)展，其相關的基因表達及蛋白質功能同樣處于量變和質變的動態(tài)過程中。自1995年第一塊CDNA芯片問世以來，它已成為研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中基因開關及表達程度是最重要的、強有力的工具。OKABE等采用包含23040個基因的芯片分析的20例原發(fā)性肝癌和癌旁組織基因表達差異，證明原發(fā)性肝癌和癌旁組織基因表達譜具有較大差異，并篩選出多個上調和下調基因。基因芯片技術對在整體上了解在癌轉移狀態(tài)下瘤細胞基因表達譜的變化、分析不同轉移潛能的肝癌細胞株的基因表達譜差異，發(fā)現更多與肝癌轉移密切相關的基因和特異信息通路、探索肝癌轉移的分子機制方面，具有十分重要的意義。如能研究發(fā)現從血液中分離克隆培養(yǎng)的肝癌細胞株的基因表達差異，有利于深入了解肝癌血液播撤的機制。目前國內外對實體瘤患者外周血中循環(huán)腫瘤細胞的研究，多局限于利用細II

簡介：目的1探討補腎中藥骨靈丸血清的最優(yōu)提取方法；2觀察補腎中藥血清對體外培養(yǎng)破骨細胞骨吸收功能的影響；3探討補腎中藥血清對破骨細胞RANK基因表達水平的影響；4探討補腎中藥對成骨破骨細胞共育體系中護骨素護骨素配體的蛋白及基因表達水平的影響及與破骨細胞活性的相關性。方法1按處方配制補腎中藥，傳統(tǒng)方法熬煮中藥，水浴鍋濃縮至252ML，SD大鼠36只隨機分成空白組生理鹽水2ML、低劑量組生藥177G次、中劑量組生藥354G次、高劑量組生藥708G次，每日早晚2次灌胃，共3天，第4日末次灌胃后1小時采血，離心，吸取血清，大部分血清56℃，30分鐘滅活保存，部分用于干預成骨細胞試驗；取SD胎鼠的頭蓋骨分離培養(yǎng)獲得純化的成骨細胞，使用MTT比色分析方法在酶標儀上測試滅活前后血清干預的成骨細胞增殖情況，記錄每組A570值；對硝基苯磷酸鹽法PNPP測各組堿性磷酸酶活性，使用SPSS100軟件包的配對T檢驗比較滅活前后血清對成骨細胞生物學作用的差別2取SD大鼠的胎鼠四肢骨分離培養(yǎng)破骨細胞OC，差異貼壁法獲得純度在95％以上的破骨細胞，分成低、中、高、空白對照四組，每組6孔，施加相應濃度的補腎中藥血清，對照組采用無中藥血清，培養(yǎng)24小時，酶動力學法測定培養(yǎng)上清中抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP的活性，甲苯胺藍染色骨吸收陷窩并在圖像分析儀下測定骨吸收陷窩的面積和數目，使用SPSS100軟件包的單因素方差分析比較補腎中藥血清對破骨細胞生物學作用的差別；3取SD大鼠的胎鼠四肢骨分離培養(yǎng)破骨細胞OC，差異貼壁法獲得純度在95％以上的破骨細胞，分成低、中、高、空白及陽性對照5組，每組6孔，施加相應濃度的補腎中藥血清，空白組采用無中藥血清，陽性對照組使用17Β雌二醇，在培養(yǎng)的破骨細胞中施加不同濃度的補腎中藥血清培養(yǎng)24小時，收集破骨細胞使用TRIZOL方法提取總RNA，使用DNAMAN軟件設計引物序列，RTPCR方法擴增目標片段，使用HEMA凝膠圖像分析系統(tǒng)檢測條帶OD值，比較各組目標帶與內參的比值，使用SPSS100軟件包的單因素方差分析反應破骨細胞中RANKMRNA表達水平的變化；4取SD大鼠的胎鼠顱骨與四肢骨分別分離、培養(yǎng)成骨細胞和破骨細胞，利用復合培養(yǎng)系統(tǒng)使二者生活在同一環(huán)境中，觀察細胞的形態(tài)變化；在復合培養(yǎng)體系中施加不同濃度的補腎中藥血清，并與空白組及雌激素組對照，培養(yǎng)24小時后收集成骨細胞，采用WESTERNBLOT方法及RTPCR雜交法測定OB細胞中OPGOPGL蛋白的改變及基因表達的變化，使用SPSS100軟件包的單因素方差分析反應成骨細胞中OPGOPGL蛋白及MRNA表達水平的變化；酶動力學法測定培養(yǎng)上清中抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP的活性，利用甲苯胺藍對骨吸收陷窩染色并在圖像分析儀下測定骨吸收陷窩的面積和數目，使用SPSS100軟件包的單因素方差分析比較補腎中藥血清對共培體系中破骨細胞生物學作用的差別，最后使用SPSS100統(tǒng)計分析軟件對OPGOPGL的比值與破骨細胞的活性關系進行相關分析。結果1補腎中藥在末次灌胃后1小時達高峰，滅活前補腎中藥低、中、高濃度組及空白對照組A570增殖率％的值分別為0809±0261、0876±0274、0851±0299、0711±0248滅活后各組A570增殖率％的值分別為0669±0179、0751±0211、0725±0209、0454±0154，各組成骨細胞的增殖率、ALP的活性在滅活前后的血清干預下有顯著性差異，P＜001，但滅活血清與對照組比較仍有明顯作用，P＜001；2單獨培養(yǎng)的破骨細胞在加入補腎中藥血清后培養(yǎng)上清中TRAP活力低、中、高與空白對照組分別是136±014UL、129±018UL、131±024UL、175±014UL補腎中藥組與對照組相比P＜001，補腎中藥組間比較P＞005；骨吸收陷窩的面積低、中、高與空白對照組分別是29323±19045ΜM2、33540±20233ΜM2、36570±18947ΜM2、49525±21037ΜM2補腎中藥組與對照組相比，P＜001，補腎中藥組間比較P＞005，骨吸收陷窩數目分別是1140±150個、1250±180個、1440±242個、1840±232個補腎中藥組與對照組相比，P＜001，補腎中藥組間比較P＞005；3RTPCR顯示，補腎中藥血清能下調破骨細胞中RANKMRNA的表達，低濃度的補腎中藥血清即可降低RANKMRNA表達，但無明顯劑量相關性補腎中藥組與對照組相比，P值均小于005，補腎中藥組間比較P＞005，E2下調RANKMRNA的表達更為明顯P＜001；4復合培養(yǎng)體系中WESTERNBLOTTING及RTPCR顯示補腎中藥血清能上調成骨細胞中OPG蛋白及OPGMRNA的表達，下調細胞中OPGL蛋白及OPGLMRNA的表達，低濃度即有效與對照組吸光度相比P＜005，不同中藥濃度組無明顯差異P＞005；E2上調成骨細胞中OPG蛋白及OPGMRNA降低OPGL蛋白及OPGLMRNA的表達最為明顯與對照組吸光度相比P＜001；補腎中藥血清能降低復合培養(yǎng)體系破骨細胞的TRAP的活力，減少骨磨片陷窩吸收面積補腎中藥組與對照組相比，P值均小于005，但亦無明顯劑量相關性，不同中藥濃度組無明顯差異P＞005，E2下調TRAP活性及減少骨磨片陷窩吸收面積更為明顯P＜001；統(tǒng)計學處理提示TRAP活力與骨磨片陷窩吸收面積服從正相關線性分布；骨磨片陷窩吸收面積和OPGOPGL服從負相關線性分布。結論1補腎中藥在末次灌胃后1小時采血此時的血清含藥物有效成分最高，滅活后血清能滿足試驗要求；2補腎中藥血清可抑制體外單獨培養(yǎng)的破骨細胞的骨吸收功能3補腎中藥血清可抑制破骨細胞的RANK基因表達水平；4補腎中藥血清可抑制體外共育體系中的破骨細胞的骨吸收功能OPGOPGL是調節(jié)破骨細胞活性的關鍵性因素，OPGOPGL的比值與破骨細胞的活性呈負相關。

簡介：內蒙古醫(yī)學院碩士學位論文細胞色素P450芳香化酶在大鼠多囊卵巢中的表達及其生物學意義姓名劉秀蘭申請學位級別碩士專業(yè)人體解剖與組織胚胎學指導教師閆曉紅博曉真20060501OABSTRACT嘲娌T主VETBS敦茹Y如REATIONSH呈P熟瞪ENTHEEXPRE胬ONLEVDOFAROMATASECY∞D蚴EF1450王U50AROMMFATO、阻RYANDMEC如舡LISMOFP枷TICO、，ARIANSYND】伽P∞S，METHO凼ES協(xié)B在出啦ANIMALMO甜OFP。LY螄ICOV撕ANSYND姍EBYTHE。。MBIN矗婦METHODPR。G鍘噬黔誠THCHO奶MC舭地DOT∞PMHO黜H℃1TOMEASURETHEIEVELSOFSENⅡNTESTOSTERONET，HNE此INGH。肌ONELH，FOUICIESTIRNUIATINGHORN∞NE磷辯璐INGANAUT。MATEDJMMJM。ASS韙YCH獻證衄LINESC∞TTEC函IQUE2TOTCLOR地A醚SEQUENCETHECYPL9GENEFRAGRNENTFROMRATOVARY，3TODETECTTHEEXPRESSIONLE詘OFCYPL9MRNAMRATOVARYBYS∞_LIQUANTITATIVEREVER8ETRANSCRIPTASEP。LYMERASECHAINRE粒TION雌一融4STREPT捌DINPER戚D85ES一功WASP酞燃EDTODETEET氐鑷一PRESSIONLEVELOFP450AROMINRATOVARYRESILLTS王THELEVELSOFSER吼TANDK料WEREHIGHERINP妁SG矧JPAS∞MPAREDWITHM。DELCONTR0IGROUP；2THEANALYSISOFCYPL9GENES幻WEDTHATTHESEQU髑CESOFDI、JAFRA酗ENTWERE研NOLOGY塒TH∞RRESPONDINGSEQUENCESPUBLISHEDINGTNEBANK3THERELATIVEE坤RESSIONDEGREEOFP450蚴MRNA吣O138O072AILDO759O236INOVARYOP∞SGR。UPANDN。RTNAJ∞NTR。LGR。UPRE，S∞NSIBIY，SIGILIF遷ANT矗FFE溜LCE、張SFOUNDBE七WE獻P∞SGROUP姐DN∞M丑LGROUP；4RES山TSOF醅MUNOC蛾STRYMEASURINGTHE耵EYVALUEOF鯽ULOSECEUSINFOUICLEBYJD801IFNAGEAN由SISSYST踟，礎PARING壬XSGROUPWITHNONNALGROUP詆THTT鸛T，THEEXPRESSIONOFP450黝WASDECREASESPO05INPRIRR施ALANDP血NARYANDMATUREFONIC【EOFPO。6拳OUP；№SI鯛I6∞NTDI玨嘲CE雌HMD惻捌FER甑T曲羽叩MENT渤靜OFD琶蹴齜一豳婦煳鯽，H刪向喇矗嘲耐槲瞧卿D№洫曲唧ANDSEC洳銣IDE哪蛐‰咖妯DEPO05C0眥L磷I她THE唧眺KVDOFP450AR僦MRNAW黔BWTHANNOMALGROUP；P4508IOM觸IN吣BWERMPRIIR埽礙AILD刪拄URE蛐DEOF溯G捌PT婦測。URRESDTS盤OWEDTHATHA即ENINGF琰SH越RELATIONSHIP、RIDLEXPRESSIONOFP450AR。MD。CREASINGM州州AANDPRDTEN聊WORDSPOLYCYS如偽撕ANSYN融NE；A煳ATASE回TOCHROMEP450；RTP隙；I勰疆賦H燃痘建RY

簡介：學位論文獨創(chuàng)性聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得壺量盤堂或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名手寫沙FJ年。其7日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解南昌大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權南昌大學可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編本學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所和中國學術期刊光盤版電子雜志社將本學位論文收錄到中國學位論文全文數據庫和中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數據庫中全文發(fā)表，并通過網絡向社會公眾提供信息服務。保密的學位論文在解密后適用本授權書學位論文作者簽名手寫槲期沙侔6月I蘆日導師簽名手寫私簽字日期加B年6月’摘要5流式細胞儀檢測細胞凋亡結果顯示空白對照組、陰性對照組、STIML沉默組胃癌細胞SGC7901凋亡率分別為795008％、901003％、3698013％，STIML沉默組與空白對照組及陰性對照組比較，沉默組細胞凋亡率明顯增加均P005。6流式細胞儀檢測細胞周期結果顯示各組胃癌細胞SGC7901培養(yǎng)48H后，空白對照組和陰性對照組胃癌細胞周期分布情況G0／G1期為3563107％、S期為5130071％、G2／M期為1314081％；G0／G1期為3746067％、S期為5089087％、G2／M期為1164030％；沉默組胃癌細胞G0／G1期為6238O91％、S期為2953071％、G2／M期為809065％；沉默組胃癌細胞大多數處于G0／G1周期，而S期和G2／M期的水平明顯下降，其SPF值、PI值明顯小于空白對照組及陰性對照組均P005。7體外遷移實驗TRANSWELL實驗結果顯示空白對照組、陰性對照組、STIML沉默組穿過聚碳酸酯膜的細胞數分別為4467153、41OO202、1450229，沉默組與空白對照組及陰性對照組比較，沉默組穿過聚碳酸酯膜的細胞數明顯減少P005。提示沉默STIML可明顯抑制胃癌細胞SGC7901體外遷移能力。8體外侵襲實驗結果顯示空白對照組、陰性對照組、STIML沉默組穿過聚碳酸酯膜的細胞數分別為2633153、2167252、733123，沉默組與空白對照組及陰性對照組比較，沉默組穿過聚碳酸酯膜的細胞數明顯減少PO05。提示沉默STIML可明顯抑制胃癌細胞SGC7901體外侵襲能力。結論STIML基因抑制后，胃癌細胞鈣內流減少，增殖能力減緩、細胞周期阻滯于G0／G1期、凋亡率增加、遷移、侵襲能力減弱。表明STIML是調控胃癌細胞增殖、遷移、侵襲過程中的重要蛋白。關鍵詞STIML；胃癌細胞；腫瘤生物學行為SOCC鈣離子

簡介：點擊查看更多胰島素對糖尿病大鼠下頜骨成骨細胞體外生物學活性的影響.pdf精彩內容。

簡介：點擊查看更多含IKVAV多肽自組裝及對神經祖細胞的生物學活性的影響.pdf精彩內容。

簡介：石河子大學碩士學位論文LICADHERIN基因表達水平的變化對胃癌細胞生物學性狀的影響研究姓名奚海林申請學位級別碩士專業(yè)外科學指導教師牛建華201004012ABSTRACTOBJECTIVESTHEINCIDENCERATEOFGASTRICCARCINOMAISALSOINTHEFIRSTPOSITIONAMONGMANLIGNANTTUMORSINOURCOUNTRY,ANDTHEMORTALITYISABOUTONEQUARTEROFGLOBALONESMOSTPATIENTSHAVEBEENPROGRESSINGTOADVANCEDSTAGEATTHETIMEOFDIAGNOSISTHERATEOFRADICALRESECTIONISLOWER,TREATMENTSINCLUDINGRADIATION,CHEMOTHERAPYORPREOPERATIVECHEMOTHERAPYHAVELITTLEINFUENCE,EVENEXERTGREATSIDEEFFECTTOPATIENTSANDATPRESENTHAVINGNONORMATIVECHEMOTHERAPY,THEREFORETHEGENETHERAPYHASBEENINTRODUCEDANDDISPLAYEDITSPROMISINGTWOIMPORTANTPROPERTIESOFCANCERSAREABLETODEREGULATECELLPROLIFERATIONANDSUPPRESSCELLDEATHLIVERINTESTINECADHERINCDH17ASONEPROTEINWHICHHAVEINTIMATECORRELATIONWITHINVASIONANDMETASTASISOFTUMOR,WHICHASWELLASHIGHLYEXPRESSESININTESTINALMUCOSATHISSTUDYEXTRACTEDANDIDENTIFIEDCDH17/PCDNA31EUKARYOTICEXPRESSINGPLASMID,ANDTRANSFECTEDITINTOBGC826CELLBYLIPOFECTMINE2000,THEPURPOSEISOBSERVINGWHETHERTHEEXTRANEOUSCDH17GENECANTRANSFECTBGC826EFFECTIVELYASAANTITUMORFACTORITPROVIDESTHEEXPERIMENTALFOUNDATIONFORFURTHERSTUDYINGTHATTRANSFECTIONOFTHISPLASMIDALONEORCOMBINEDWITHOTHERPLASMIDSTOBLOCKTHESTOMACHNEOPLASMSINDIFFERENTSTEPSMETHOD1TRANSIENTTRANSFECTIONANDEXPRESSIONOFGASTRICTUMORCELLSGASTRICCARCINOMABGC826CELLSWERETRANSFECTEDWITHLIPOFECTAMINE2000PROTEINOFCELLSWEREEXTRACTEDATTHETIMEOF48HAFTERTRANFECTED,THEMETHODOFWESTERNBLOTWASUSEDTOIDENTIFYTHEEXPRESSIONOFCDH172THEASSAYSAFTERTRANSIENTTRANSFECTIONINVITROTHEASSAYSWEREDIVIDEDINTOTHREEGROUPS,THECELLSTRANSFECTEDBYCDH17/PCDNA31WASEXPERIMENTALGROUPS,THECELLSTRANSFECTEDBYPCDNA31WASBLANKCONTROLANDBGC826CELLSUNTRANSFECTEDWASNEGATIVECONTROLCELLMATRIGELINVASIONASSAY,SCRATCHINGASSAYWEREUSEDTOSTUDYTHEEFFECTSOFCDH17GENERESULTS1TRANSIENTEXPRESSIONOFCDH17AFTERTRANSFECTEDAFTERTRANSFETED48H,PROTEINOFCDH17WASDETECTEDWITHWESTERNBLOT2ALLASSAYSSHOWEDTHATTHEINVASIVENESSANDMIGRATIONOFBGC826CELLSTRANSFECTEDBYCDH17/PCDNA31WERELESSTHANTHOSEOFBGC826CELLSTRANSFECTEDBYPCDNA31ANDUNTRANSFECTEDCELLSCONCLUSIONCDH17HASBEENSUCCESSFULLYTRANSFECTED,THEYCANBEEXPRESSEDINTHEGASTRICCARCINOMACELLSALLASSAYSSUGGESTTHATCDH17CANAFFECTBIOLOGICALCHARACTERSOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLLINEBGC826THEYMAYDEPRESSTHEINVASIONANDMETASTASISOFGASTRICCARCINOMACELLLOCALCANCERVIOLATIONSORDISTANTMETASTASISOFTENLEADTOTREATMENTFAILUREOFTHEMAINREASONS,THEINCIDENCEOFGASTRICCANCERONTHEMOLECULARMECHANISMOFTHEBIOLOGICALBEHAVIORANDTHESEARCHFORNEWANTITRANSFERMEASURESISCRUCIALKEYWORDSCDH17TRANSFECTIONGASTRICNEOPLASMINVASION

簡介：研究背景與目的吸煙與環(huán)境氡是誘發(fā)人類肺癌的兩大重要因素，單獨吸煙和氡誘發(fā)肺癌的研究廣泛而深入，但兩者聯(lián)合作用及其機制研究報道很少。本研究觀察Q粒子和煙草代表性致癌物4甲基亞硝胺13吡啶基1丁酮NNK聯(lián)合作用體外培養(yǎng)細胞的生物學效應及相關機制，并探索兩者作用順序的差異，為環(huán)境氡與吸煙的聯(lián)合危害評價提供實驗依據。材料與方法永生化的人支氣管上皮細胞BEP2D分為正常對照組NC、單純Α粒子照射組Q、單純NNK染毒組NNK、NNK100GG／M1染毒后Q粒子照射組NNKΑ和Α粒子照射后NNK100TG／M1染毒組QNNK。觀察Α粒子和NNK誘發(fā)的細胞存活率、細胞內活性氧水平、膜通透性損傷、DNA損傷、HPRT基因突變、微核形成、細胞轉化及染色體和相關基因表達。結果1Q粒子和NNK聯(lián)合作用對BEP2D細胞存活的影響具有明顯的協(xié)同作用，并與兩者作用順序有關。2Q粒子和NNK聯(lián)合作用誘發(fā)BEP2D細胞內產生的活性氧水平、細胞膜損傷、DNA損傷、HPRT基因突變以及細胞微核形成率等多種生物學效應具有明顯的協(xié)同作用，但兩者作用不同順序間沒有觀察到有明顯差異。3Q粒子015GY和NNK100TG／M1單獨或聯(lián)合染毒的細胞長期培養(yǎng)，NNK、NNKA、ANNK三組細胞具有惡性轉化特征，轉化細胞的染色體出現數目和結構的異常，HPRT基因突變率和轉化相關蛋白PCNA、P53表達顯著增高。結論證實Α粒子和NNK對細胞損傷具有協(xié)同作用，觀察到A粒子和NNK不同作用順序對細胞存活效應有明顯差異；反應細胞惡性轉化過程的部分指標觀察到A粒子和NNK的聯(lián)合作用及兩者作用順序的差異。

簡介：東南大學碩士學位論文低頻超聲聯(lián)合微泡劑對血管內皮細胞和肝癌細胞生物學效應的體外實驗姓名房良華申請學位級別碩士專業(yè)內科學（腫瘤學）指導教師姜藻20060606東南大學碩士學位論文為8331459U／ML，肝癌細胞為1107331175U／ML，與對照組比較差異顯著儼OOD；SOD活力明顯降低血管內皮細胞為69524281U／ML，肝癌細胞為58874191U／ML，與對照組比較差異顯著PO05。5血管內皮細胞和肝癌細胞超聲聯(lián)合微泡劑組NFRB蛋白灰度值明顯高于其他各組，與對照組比較差異有顯著性尸0OD。與單純超聲組比較差異顯著伊005，與單純微泡荊組比較妒001。結論L超聲聯(lián)合微泡劑具有明顯的抑制離體血管內皮細胞和肝癌細胞的增殖，并誘導其損傷和凋亡的作用；2超聲聯(lián)合微泡劑所致的細胞外活性氧的活力增高，SOD活力的降低，NFKB的表達增高等與細胞的損傷和凋亡作用相關。關鍵詞低頻超聲；微泡劑；活性氧自由基；EVC304；SMMC一7721Ⅱ

簡介：神經營養(yǎng)因子是一類促進神經細胞存活、生長、分化的多肽分子，在神經系統(tǒng)發(fā)育、分化和損傷修復過程中起著非常重要的作用。NEURITIN是一種新近發(fā)現的與神經可塑性相關的神經營養(yǎng)因子。研究表明NEURITIN在神經再生的領域中具有較廣泛的生物學活性，可促進神經突起的快速生長和分支，并參與調節(jié)神經元突觸活動，因而對多種因素引起的神經系統(tǒng)損傷后軸突和突起的生長具有潛在的治療與預防作用。由于NEURITIN體內含量低，提取與純化困難，難以滿足研究和臨床治療需要，因此以基因工程的方法制備重組人的NEURITIN將是獲取NEURITIN有效的手段。本論文就NEURITIN在原核表達、純化及生物學活性測定等進行了研究，這為臨床上用基因治療神經系統(tǒng)疾病奠定了實驗基礎。本實驗是以NEURITINCDNA為模板，PCR擴增NEURITIN基因后，克隆于原核表達載體PET32A，分別用NOCI和NOTI雙酶切鑒定。鑒定正確的重組子PET32NEURITIN轉化大腸桿菌BL21，測序正確的陽性轉化子用IPTG誘導后獲得了融合NEURITIN蛋白；SDSPAGE分析表明大腸桿菌表達菌株經IPTG誘導后，可表達分子量為30KD的融合NEURITIN蛋白質并且在4小時時表達量最大；WESTEMBLOT檢測表明該表達產物具有NEURITIN免疫活性；經NINTA純化系統(tǒng)及尿素分步透析，表達蛋白得到了有效的純化和復性。最后，對重組NEURITIN的活性進行鑒定。結果表明與陰性和空白組對照后，大腸桿菌表達的融合的NEURITIN在體外能促進培養(yǎng)的PC12細胞和雞胚背根神經節(jié)神經突起的生長并能延長它們的存活時間。本研究首次報道了重組人NEURITIN在大腸桿菌的表達以及在體外實驗中促進雞胚神經節(jié)和PC12細胞突起的生長，這項工作為神經營養(yǎng)因子NEURITIN在神經系統(tǒng)疾病的治療的應用中奠定了良好的基礎。

簡介：學位論文不同HER2水平的人乳腺癌BT474細胞內MIRNAS表達譜及相關MIRNAS對癌細胞生物學行為的影響MICRNASEXPRESSIONPROFILEINHUMANBREASTCANCERBT474CELLSOFDIFFERENTHER2LEVELSEFFECTOFMICRNASONTUMCELLBIOLOGICALBEHAVI朱桂璐朱桂璐指導教師姓名吳強教授安徽醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院病理教研室吳正升副教授安徽醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院病理教研室申請學位級別碩士專業(yè)名稱病理學與病理生理學提交論文日期20150310論文答辯日期20150508學位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學201506答辯委員會主席孟剛評閱人2015年05月安徽醫(yī)科大學ANHUIMEDICALUNIVERSITY碩士學位論文不同HER2水平的人乳腺癌BT474細胞內MIRNAS表達譜及相關MIRNAS對癌細胞生物學行為的影響MICRNASEXPRESSIONPROFILEINHUMANBREASTCANCERBT474CELLSWITHDIFFERENTLEVELOFHER2EFFECTOFMICRNASONTUMCELLBIOLOGICALBEHAVI作者姓名作者姓名朱桂璐朱桂璐指導教師指導教師吳強教授吳正升吳正升副教授副教授學科專業(yè)學科專業(yè)病理學與病理生理學病理學與病理生理學研究方向研究方向乳腺腫瘤病理乳腺腫瘤病理論文工作論文工作時間時間2013年04月至月至2015年05月

簡介：目的探討慢病毒載體介導的轉化生長因子Β3（TGFΒ3）、基質金屬蛋白酶抑制劑1（TIMP1）聯(lián)合感染對體外培養(yǎng)人退變椎間盤髓核細胞的影響，從而最終實現延緩甚至逆轉椎間盤退變的目的。方法單層培養(yǎng)人退變椎間盤髓核細胞，采用綠色熒光蛋白標記慢病毒（GV287EGFP）評價其對髓核細胞的感染效率。應用構建的TGFΒ3P2ATIMP1慢病毒載體感染髓核細胞，在倒置纖維鏡下觀察細胞形態(tài)學變化，通過REALTIMEQPCR技術檢測感染后TGFΒ3、TIMP1、Ⅱ型膠原和蛋白多糖的MRNA表達量，通過WESTERNBLOT技術檢測感染后Ⅱ型膠原和蛋白多糖含量，最終評價應用攜帶TGFΒ3P2ATIMP1的慢病毒載體體外感染人退變椎間盤髓核細胞后對其細胞外基質代謝的影響。結果感染復數（MOI）為60時可獲較滿意感染效率。REALTIMEQPCR示目的基因感染組的TGFΒ3、TIMP1、Ⅱ型膠原、蛋白多糖MRNA表達量均明顯高于空病毒感染組及空白對照組（F＝16350～74378，Q2010～10620，P結論慢病毒載體介導的TGFΒ3和TIMP1雙基因聯(lián)合感染人椎間盤髓核細胞可長時間穩(wěn)定表達，發(fā)揮生物學效應，促進蛋白多糖和Ⅱ型膠原的合成，并最終改善髓核細胞外基質的代謝。

簡介：分類號R651密級科學學位團專業(yè)學位口學校代碼10062學號2011602261學科門類醫(yī)學又坪鼉科矢號TLA棚麓■纛DH搿瞧VN霸鑲礴目N愕碩士學位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目敲低亮氨酰TRNA合成酶表達對惡性膠質瘤細胞生物學行為影響的體外研究TITLEASTUDYABOUTTHEEFFECTOFDOWNREGULATIONOFLEUCYITRNASYNTHETASEONMALIGNANTGLIOMACELLBIOLOGICALBEHAVIOR／NVITRO一級學科臨床醫(yī)學二級學科外科學神經外科論文作者譚富強指導教師鐘躍教授天津醫(yī)科大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要膠質瘤是臨床上最常見的原發(fā)性惡性腦腫瘤，其中多形性膠質母細胞瘤GLIOBLASTOMAMULTIFORME，GBM是最常見、惡性程度最高的膠質瘤。雖然在過去幾年膠質瘤的研究取得了很大進步，但惡性膠質瘤病人的預后仍然很差。膠質母細胞瘤是一種多基因和多信號通路異常的疾病，目前對其發(fā)病機制仍不是很清楚。近來研究發(fā)現，亮氨酰TRNA合成酶1EUCYLTRNASYNTHETASE，LARS除其催化亮氨酰TRNA合成的經典功能外，還具有非經典功能，是腫瘤相關基因。但LARS在膠質瘤中的研究鮮有報道。MICRORNASMIRS是一類小的非編碼RNA，負責轉錄后調控基因表達。研究表明MIRS在多種腫瘤包括膠質瘤中異常表達，扮演癌基因或抑癌基因的作用。目前尚不清楚LARS是否與MIRS存在關系。本課題研究的主要目的是探討LARS基因在惡性膠質瘤中的表達和對膠質瘤細胞生物學行為的影響以及MIR451與LARS基因表達關系，為揭開膠質瘤的發(fā)病機制、開拓新的治療策略和靶點提供線索。第一部分應用熒光實時定量PCRREALTIMEPCR和蛋白印跡法WESTERNBLOT檢測了9個惡性膠質瘤細胞系和1例正常腦組織的LARS表達量，結果顯示LARS在9個惡性膠質瘤細胞系和L例正常腦組織均有表達且在9個惡性膠質瘤細胞系中的表達量明顯高于正常腦組織P005。由此，我們得出結論LARS在人腦膠質瘤中過表達，可能參與膠質瘤的發(fā)生和進展。第二部分利用LARS小干擾RNALARSSIR技術探討了敲低LARS表達對惡性膠質瘤細胞系U251和SNBL9生物學行為的影響及可能的機制。首先，利用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT實驗方法檢測了轉染LARSSIR后LARS基因的表達變化，結果顯示LARSSIR可以有效敲低LARS表達。緊接著敲低LARS表達后，利用MTT法分析了細胞增殖活性，細胞平板克隆形成實驗分析了細胞群體依賴性和增殖能力，流式細胞術分析了細胞周期分布，劃痕、TRANSWELL實驗