簡介：點(diǎn)擊查看更多基于金納米顆粒的呼吸道合胞病毒及其細(xì)胞膜受體免疫分析新方法研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的構(gòu)建含有人骨形態(tài)發(fā)生蛋白4基因的非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體ADEHBMP4并檢測目的基因的表達(dá)，以期用于骨組織工程基因治療的研究。方法ECI雙酶切質(zhì)粒PCS2HBMP4獲得目的基因片段，將HBMP4基因片段首先克隆至非病毒真核表達(dá)載體PCDNA31，后利用該載體上含有的酶切位點(diǎn)KPNI和XBAI，再將HBMP4基因片段定向克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒PSHUTTLECMV，接著用電穿孔法轉(zhuǎn)化至含有骨架質(zhì)粒PADEASY1的ECOLIBJ5183P中進(jìn)行同源重組，脂質(zhì)體法將腺病毒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞，利用HEK293細(xì)胞中表達(dá)的腺病毒E1蛋白將重組體包裝成含有HBMP4基因的完整非復(fù)制型腺病毒，病毒顆粒感染HEK293和HELA細(xì)胞，提取總RNA和總蛋白，進(jìn)行RTPCR和WESTERNBLOT檢測。結(jié)果獲得了含有目的基因的非病毒真核表達(dá)載體PCDNA31HBMP4，經(jīng)酶切、測序構(gòu)建正確，RTPCR和WESTERNBLOT檢測可以表達(dá)HBMP4；構(gòu)建成功非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體ADEHBMP4，酶切提示構(gòu)建正確，RTPCR檢測到HBMP4基因的轉(zhuǎn)錄，WESTERNBLOT檢測到HBMP4蛋白表達(dá)。結(jié)論將目的基因HBMP4克隆至非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體中，為進(jìn)一步研究其在骨缺損基因治療中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

簡介：該研究成功地獲得重組四片段HVR1融合抗原并對其對血清的交叉性及其抗體的保護(hù)性進(jìn)行了研究為了進(jìn)一步明確我們研究的F4HVR1是否能有效地作為疫苗免疫原還必須進(jìn)一步研究F4HVR1AB的交叉保護(hù)作用我們發(fā)現(xiàn)抗F4HVR1抗體能捕獲2份丙肝病人血清中的病毒粒子并能阻止這兩份血清中的病毒感染敏感細(xì)胞通過RTPCR我們獲得了這兩份血清的HVR1序列測序結(jié)果說明這兩份血清中的HVR1序列與12份HVR1代表序列都不相同證明了我們抗體具有交叉保護(hù)作用這一點(diǎn)對HCV疫苗研究是至關(guān)重的綜上所述該研究創(chuàng)新性地運(yùn)用基因重組的方法將幾條具有相對高交叉性的HVR1串聯(lián)表達(dá)大大提高了所獲得的重組HVR1抗原的交叉反應(yīng)性克服了由于HVR1高變而難以測定HCV感染病人中和性抗體產(chǎn)生情況尤其高交叉免疫原的獲得為進(jìn)一步預(yù)防性疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)該研究思路有所創(chuàng)新同時(shí)對從事其他高變病毒的疫苗研究來說具有借鑒意義

簡介：腸道病毒71型又稱ENTEROVIRUSE71簡稱EV71，人類感染以后主要引起手足口病，主要癥狀為感染者有發(fā)熱癥狀，手掌或腳掌出現(xiàn)皰疹，口腔黏膜出現(xiàn)散在的皰疹并伴有疼痛的感覺。另外，EV71感染后通常伴有嚴(yán)重的神經(jīng)性癥狀，例如無菌性腦膜炎，腦干炎，脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹和神經(jīng)性咽峽炎等。嚴(yán)重的還會出現(xiàn)肺水腫最終可導(dǎo)致死亡。EV71主要易感人群為五歲以下的幼兒，從1969年加利福尼亞首次發(fā)現(xiàn)至今，已發(fā)生了10多次的大流行，近幾年尤其在亞太地區(qū)流行更加頻繁，因此研究EV71的感染有著重要的意義。EV71屬于小RNA病毒科腸道病毒屬的成員。病毒顆粒是二十面體的立體對稱的球形結(jié)構(gòu)，無包膜和突起，直徑為30NM?；蚪M為74K的單股正鏈RNA，單一的開放閱讀框，編碼3個(gè)前體蛋白P1，P2，P3三個(gè)前體蛋白在分別裂解為4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白VP1，VP2，VP3，VP4和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白2A，2B，2C，3A，3B，3C和3D。各個(gè)蛋白都有著自己特定的功能。鈣離子是生物體內(nèi)最重要的無機(jī)離子之一。鈣離子能調(diào)節(jié)生物體內(nèi)的多種生理活動(dòng)。包括細(xì)胞的生長，基因的調(diào)節(jié)，肌肉的收縮，以及細(xì)胞的死亡等等。我們發(fā)現(xiàn)在EV71感染細(xì)胞以后會引起細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子的升高，對此我們做了深入的探究，發(fā)現(xiàn)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子的釋放是引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高的重要原因，另外伴隨細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子升高的同時(shí)，細(xì)胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度也是升高的。根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道細(xì)胞線粒體鈣離子升高與細(xì)胞的凋亡情況有著密切的聯(lián)系。因此根據(jù)我們的研究，EV71感染細(xì)胞引起的鈣離子變化或許與細(xì)胞凋亡有著密切的聯(lián)系。

簡介：點(diǎn)擊查看更多鞘磷脂酶在柯薩奇病毒B3感染心肌細(xì)胞中的作用研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：研究背景膝關(guān)節(jié)置換術(shù)（TOTALKNEEARTHROPLASTY，TKA）是嚴(yán)重膝骨關(guān)節(jié)病變最有效的治療方法。該手術(shù)創(chuàng)傷較大、術(shù)后疼痛劇烈且患者多為老年，因腰椎退行性病變較多及圍術(shù)期抗凝藥物的常規(guī)使用，全身麻醉已成為重要選擇之一。術(shù)后的劇烈疼痛嚴(yán)重影響著患者的功能鍛煉和康復(fù)效果，因此TKA術(shù)后良好的鎮(zhèn)痛對患者最終關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)動(dòng)能的恢復(fù)尤為重要。國內(nèi)外大量臨床研究顯示不論是單次還是連續(xù)股神經(jīng)阻滯股神經(jīng)阻滯都能有效改善TKA患者術(shù)后鎮(zhèn)痛的效果、降低圍術(shù)期阿片類藥物用量、加快患者術(shù)后功能鍛煉和恢復(fù)、降低不良反應(yīng)的發(fā)生率等，由于操作簡便、安全性較高等特點(diǎn)，在TKA患者中應(yīng)用廣泛。但是臨床上實(shí)施股神經(jīng)阻滯的時(shí)間并不一致，術(shù)前或術(shù)后都有。術(shù)前和術(shù)后不同時(shí)間的股神經(jīng)阻滯對TKA患者術(shù)后鎮(zhèn)痛的效果有無影響；如果在術(shù)前應(yīng)用股神經(jīng)阻滯，對TKA患者是否具有超前鎮(zhèn)痛作用，目前尚不明確。研究指出骨科手術(shù)、術(shù)后疼痛和年齡60歲都是術(shù)后認(rèn)知功能障礙（POSTOPERATIVECOGNITIVEDYSFUNCTION，POCD）發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一，因此預(yù)防和減少全麻下TKA老年患者POCD的發(fā)生十分必要。炎性反應(yīng)可能是POCD發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，早年曾有學(xué)者提出外周神經(jīng)阻滯技術(shù)可能給炎性反應(yīng)的治療帶來新的希望，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究已發(fā)現(xiàn)外周神經(jīng)阻滯能更好的改善術(shù)后疼痛和炎性反應(yīng)。股神經(jīng)阻滯能否通過改善全麻下TKA老年的術(shù)后疼痛和炎性反應(yīng)從而對術(shù)后早期認(rèn)知功能產(chǎn)生影響，尚不明確。研究目的通過手術(shù)前后不同時(shí)間的股神經(jīng)阻滯對全麻下TKA老年患者術(shù)后鎮(zhèn)痛效果的影響，擬探討股神經(jīng)阻滯是否具有超前鎮(zhèn)痛作用；通過比較股神經(jīng)阻滯、閉孔神經(jīng)阻滯及對照組對全麻下TKA老年患者早期POCD發(fā)生率的影響，擬探討股神經(jīng)阻滯是否能改善全麻下TKA老年患者早期POCD的發(fā)生率；通過比較股神經(jīng)阻滯及對照組對全麻下TKA老年患者術(shù)后早期炎性反應(yīng)和神經(jīng)損傷的影響，擬探討股神經(jīng)阻滯影響全麻下TKA老年患者術(shù)后早期認(rèn)知功能的可能機(jī)制，為TKA老年患者的疼痛管理和POCD預(yù)防提供新的思路。研究方法1采用隨機(jī)數(shù)字表法，分為3組對照組（Ⅰ組）不實(shí)施股神經(jīng)阻滯；術(shù)前股神經(jīng)阻滯組（Ⅱ組）于麻醉誘導(dǎo)前行超聲引導(dǎo)下單次股神經(jīng)阻滯；術(shù)后股神經(jīng)阻滯（Ⅲ組）于手術(shù)結(jié)束即刻行超聲引導(dǎo)下單次股神經(jīng)阻滯。術(shù)后三組患者均行PCIA鎮(zhèn)痛。分別記錄兩組患者術(shù)后2H、6H、12H、24H、48H、72H時(shí)靜息狀態(tài)VAS評分與術(shù)后12H、24H、48H、72H時(shí)運(yùn)動(dòng)狀態(tài)VAS評分，及術(shù)后24H內(nèi)PCIA中的舒芬太尼用量、PCIA的有效按壓次數(shù)（D1）和實(shí)際按壓次數(shù)（D2），并計(jì)算D1D2；記錄術(shù)后24H內(nèi)不良反應(yīng)發(fā)生情況。2采用隨機(jī)數(shù)字表法，分為3組對照組（Ⅰ組）、股神經(jīng)阻滯組（Ⅱ組）和閉孔神經(jīng)阻滯組（Ⅲ組）。Ⅱ和Ⅲ組患者分別于麻醉誘導(dǎo)前行患側(cè)股神經(jīng)和閉孔神經(jīng)阻滯，空白對照組不實(shí)施股神經(jīng)阻滯。分別記錄兩組患者術(shù)中的麻醉時(shí)間、麻醉藥用量、手術(shù)時(shí)間及出血量；并記錄入室、開始手術(shù)及隨后每30MIN患者的MAP及HR至手術(shù)結(jié)束；記錄每組患者術(shù)中血管活性藥使用率；分別測試3組患者在術(shù)前1D和術(shù)后3、7D的MMSE評分并計(jì)算術(shù)后3、7D的POCD發(fā)生率。3采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其分為2組對照組（Ⅰ組）和股神經(jīng)阻滯組（Ⅱ組）。Ⅱ組于麻醉誘導(dǎo)前行患側(cè)股神經(jīng)阻滯。所有患者分別于麻醉開始前、手術(shù)結(jié)束時(shí)、術(shù)后2H時(shí)抽取動(dòng)脈血樣1ML行血?dú)夥治鲇涗汸H值、LAC值及血糖值；分別于術(shù)前1DT0、術(shù)后2HT1、術(shù)后6HT2、術(shù)后12HT3、術(shù)后1DT4時(shí)采集外周靜脈血5ML，由經(jīng)過培訓(xùn)且不參與麻醉的同一測試者采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿TNFΑ和IL6水平；并于分別于術(shù)前1DT0、術(shù)后1DT4、術(shù)后3DT5和術(shù)后7DT6時(shí)采集外周靜脈血5ML，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清AΒ和TAU蛋白濃度。研究結(jié)果1與對照組比較，術(shù)前股神經(jīng)阻滯組和術(shù)后股神經(jīng)阻滯組術(shù)后2H、6H、12H靜息狀態(tài)VAS評分與術(shù)后12H運(yùn)動(dòng)狀態(tài)VAS評分降低、術(shù)后24H內(nèi)PCIA的舒芬太尼用量減少、D1D2升高、惡心嘔吐的發(fā)生率也降低（P005）。2與對照組比較，股神經(jīng)阻滯組患者麻醉時(shí)間、手術(shù)時(shí)間、出血量及術(shù)中丙泊酚的總用量差異無顯著性（P005），但術(shù)中瑞芬太尼的總用量顯著減少（P005）；三組患者從麻醉開始到手術(shù)結(jié)束各時(shí)間點(diǎn)的MAP、HR的動(dòng)態(tài)變化及術(shù)中血管活性藥物使用率比較差異無顯著性（P005）；術(shù)后3D時(shí)，與空白對照組比較，股神經(jīng)阻滯組的MMSE評分顯著增高，POCD的發(fā)生率顯著降低，而閉孔神經(jīng)阻滯組的MMSE評分和POCD發(fā)生率差異無顯著性（P005）；術(shù)后7D時(shí)，三組的MMSE評分和POCD發(fā)生率比較差異無顯著性（P005）。3與對照組比較，股神經(jīng)阻滯組患者在手術(shù)結(jié)束及術(shù)后2H的血糖值顯著降低（P005）；與術(shù)前T0時(shí)刻比較，術(shù)后T1、T2、T3和T4時(shí)刻兩組患者的血漿TNFΑ和IL6水平均顯著升高（P005）。研究結(jié)論1股神經(jīng)阻滯能改善全麻下TKA老年患者術(shù)后早期PCIA的鎮(zhèn)痛效果，降低術(shù)中和術(shù)后早期阿片類藥物用量，但是無超前鎮(zhèn)痛作用。2股神經(jīng)阻滯能降低全身麻醉下TKA老年患者術(shù)后早期認(rèn)知功能障礙的發(fā)生率。3股神經(jīng)阻滯能抑制全麻下TKA老年患者術(shù)后早期炎性反應(yīng)。4股神經(jīng)阻滯能通過改善全麻下TKA老年患者術(shù)后早期的疼痛和炎性反應(yīng)，從而減輕神經(jīng)損傷，改善術(shù)后早期的認(rèn)知功能。

簡介：分類號R7801密級單位代碼10422學(xué)號0767016◎厶茹辦孑碩士學(xué)位論文HANDONGUNIVERSITYMASTERSTHESIS論文題目大學(xué)生口腔健康認(rèn)知與行為的調(diào)查分析RECOGNITIONANDBEHAVIORRELATEDTOORALHEALTHAMONGUNDERGRADUATESTUDENTSOFSHANDONGUNIVERSITY作專導(dǎo)合作導(dǎo)師2010年LO月20日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄一中文摘要3二英文摘要5三符號說明8四論文9前言9日U吞。方法1L結(jié)果12第一部分基本資料12第二部分山東大學(xué)1227名本科生口腔健康認(rèn)知和行為現(xiàn)況12第三部分山東大學(xué)1227名本科生口腔健康認(rèn)知和行為年級差異15第四部分山東大學(xué)1227名本科生口腔健康認(rèn)知及行為性別差異15第五部分山東大學(xué)1227名本科生口腔健康認(rèn)知及行為校區(qū)差異17討論20結(jié)論23參考文獻(xiàn)27五綜述29不同人群的口腔保健概況29六附錄35大學(xué)生口腔健康知識問卷調(diào)查表35大學(xué)生口腔健康行為及習(xí)慣的調(diào)查表37七攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文38八致謝47

簡介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文妊娠合并人乳頭瘤病毒感染對母兒影響的探討姓名鄭曉霞申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師王謝桐20081028山東大學(xué)碩士學(xué)位論文感染率經(jīng)陰分娩組393％，剖宮產(chǎn)分娩組391％；新生兒咽、外陰分泌物HPV感染率經(jīng)陰分娩組314％，剖宮產(chǎn)分娩組371％；新生JIAI陰分泌物HPV感染率經(jīng)陰分娩組3258％，剖宮產(chǎn)分娩組3608％。均P005，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5感染陽性嬰兒HPV轉(zhuǎn)歸情況產(chǎn)后6個(gè)月嬰兒咽喉分泌物HPV陽性率1505％28／186，外陰分泌物HPV陽性率為1774％33／186，產(chǎn)后12個(gè)月時(shí)HPV感染情況咽分泌物5例陽性2688％，外陰分泌物2例陽性1075％。產(chǎn)后兩年復(fù)查，均轉(zhuǎn)為陰性。未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)時(shí)感染陰性而后又有感染者。6乳汁HPV檢測結(jié)果初乳HPV陽性者55例，占2956％，產(chǎn)后6個(gè)月復(fù)查陽性者10例，陽性率為537％。結(jié)論妊娠期婦女下生殖道HPV感染率高于同期非妊娠婦女，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變CIN的發(fā)病率與同期非妊娠婦女相比無明顯升高。HPV可經(jīng)垂直傳播途徑引起宮內(nèi)感染，剖宮產(chǎn)不能阻止新生兒HPV感染，選擇性剖宮產(chǎn)較經(jīng)陰分娩對嬰兒也無顯著的保護(hù)作用。但嬰幼兒的轉(zhuǎn)陰率極高，未見胎嬰兒生長發(fā)育異常，新生兒呼吸道乳頭瘤發(fā)病率極低。母乳喂養(yǎng)不增加?jì)雰篐PV感染機(jī)率。持續(xù)HPV感染患者可在病毒負(fù)荷量低時(shí)計(jì)劃妊娠。HPV感染不是人工終止妊娠的指征。關(guān)鍵詞人乳頭瘤病毒妊娠感染性疾病傳播垂直傳播聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)診斷治療母乳喂養(yǎng)2

簡介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文口腔科患者對牙周病認(rèn)知情況的調(diào)查分析姓名陳中菲申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師劉宏偉20060518碩士學(xué)位論文本研究采用自擬問卷調(diào)查表進(jìn)行調(diào)查，了解在口腔科就診的患者對關(guān)于牙周病方面知識的認(rèn)識水平及薄弱環(huán)節(jié)，為在工作中對人們采取有針對性的口腔健康教育及治療提供參考依據(jù)。參與問卷調(diào)查的人群選自2005年5月至9月問在武警上?？傟?duì)醫(yī)院口腔科就診的患者，共計(jì)185例，其中男93例，女92例，本科以下學(xué)歷的88例，本科學(xué)歷79例，本科以上學(xué)歷18例，干部35例，農(nóng)民37例，工人42例，學(xué)生32例，其他職業(yè)39例。問卷內(nèi)容涉及牙周病癥狀，可引起牙周病的不良習(xí)慣，和牙周病有關(guān)的全身因素及口腔局部因素，菌斑及其控制，刷牙目的及每次刷牙時(shí)間，“洗”牙間隔，牙周治療費(fèi)用的接受能力以及預(yù)防牙周病的措旌。調(diào)查結(jié)果顯示，口腔科患者對牙周病癥狀認(rèn)知程度較高，文化程度越高認(rèn)知程度越高，不同職業(yè)中農(nóng)民、工人及學(xué)生較干部的知曉率略低，女性對牙周病早期癥狀比男性更為敏感?？梢鹧乐懿〉牟涣忌盍?xí)慣較多，患者對夜磨牙、長期用口呼吸少見的習(xí)慣知曉率偏低，對一些常見的不良習(xí)慣如牙簽剔牙、牙咬硬物、單側(cè)咀嚼，刷牙過重有所了解，但在生活中是否可以真正避免，才是能否避免疾病發(fā)生的關(guān)鍵。牙周病是多因素疾病，全身因素可以增加宿主對細(xì)菌及其產(chǎn)物等致病因子的敏感性，降低或改變牙周組織對外界刺激的抵抗力，促進(jìn)疾病的發(fā)生和發(fā)展。由于近年來糖尿病患者的增多，糖尿病知識的普及引起了人們對牙周病與糖尿病之間關(guān)系的注意，調(diào)查中人們對此知曉率較高，其中以男性和干部居多。社會壓力的增大，使80％的男性，100％本科以上學(xué)歷的人及86％的干部意識到精神長期緊張易導(dǎo)致牙周病的發(fā)生或加重。內(nèi)分泌功能的紊亂時(shí)期如青春期、妊娠期容易發(fā)生牙周病，在這些特殊時(shí)期里人們應(yīng)該更加注意口腔狀況，但只有小部分人群能有所認(rèn)識。知道遺傳與牙周病也有一定關(guān)聯(lián)的人僅10％，文化程度越高知道的人越多。吸煙是最為人們所認(rèn)知的與牙周病有關(guān)的口腔局部因素，97％的人知道，相比之下，能意識到不適合的假牙對牙周組織也有不良影響有25％的人。實(shí)際臨床中不良修復(fù)體是造成牙齦炎癥和牙周破壞的常見原因?！熬摺笔谴蟛糠秩吮容^陌生的名詞，僅有25％的人聽說

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文EBNA1穩(wěn)定鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)EB病毒基因組作用的初步探討姓名何玉文申請學(xué)位級別碩士專業(yè)藥理學(xué)指導(dǎo)教師黃民杜軍20060501EBNAL穩(wěn)定鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)EB病毒基因組作用的初步探討4EBNAL真核表達(dá)載體的構(gòu)建及WESTERNBLOT檢測PCR擴(kuò)增EBV的EBNAILRL和LR2一DNA結(jié)合區(qū)兩段功能片斷，先后連于真核表達(dá)載體PCDNA31／MYCHISC，完成EBNAL真核表達(dá)載體的構(gòu)建，將其命名為PTEBNA。將PTEBNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，通過WESTERNBLOT檢測EBNAL的表達(dá)。5PTEBNA穩(wěn)定EBV基因組的功能鑒定在感染后第九天的CNEB2細(xì)胞轉(zhuǎn)染PTEBNA及空載體，通過檢測EBER的轉(zhuǎn)錄持續(xù)期間，驗(yàn)證PTEBNA具有穩(wěn)定EBV基因組于鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)的功能。結(jié)果1形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)CNEBL和CNEB2細(xì)胞形態(tài)有所改變，由多邊形變成梭形，一些細(xì)胞內(nèi)有許多空泡生成，貼附能力明顯減弱。2對CNEB2細(xì)胞的CAJADRBI基因的檢測結(jié)果為陰性，證明抗體激活補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)?zāi)苡行コ鼴958細(xì)胞。3在DNA水平檢測到了BAMHIW基因，證明CNEB2細(xì)胞內(nèi)存在EBV基因，在RNA水平檢測到BZLF一1轉(zhuǎn)錄持續(xù)12天，EBER轉(zhuǎn)錄持續(xù)14天。通過SOUTHERNHYBRIDIZE雜交的方法進(jìn)一步驗(yàn)證了BZLF一1的轉(zhuǎn)錄。4成功構(gòu)建了EBNAL真核表達(dá)載體PTEBNA，通過WESTERNBLOT檢測到目的基因EBNAL可以在真核細(xì)胞中表達(dá)。5轉(zhuǎn)染PTEBNA的CNEB2細(xì)胞內(nèi)EBV基因持續(xù)時(shí)間明顯長于對照組。結(jié)論本研究通過建立EBV陽性的鼻咽癌細(xì)胞模型，主要得出以下結(jié)論鼻咽癌細(xì)胞與8958細(xì)胞接觸共培養(yǎng)的方法是鼻咽癌細(xì)胞感染EBV的有效途徑。與CNEL相比CNE2的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境更適合EBV的潛伏感染?？贵w激活補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)?zāi)苓x擇性地去除B958細(xì)胞。CNEB2細(xì)胞內(nèi)BZLF1及EBER轉(zhuǎn)錄的檢測結(jié)果揭示了EBV初始感染鼻咽癌后由裂解期到潛伏期轉(zhuǎn)變的規(guī)律。成功構(gòu)建了EBNAL的真核表達(dá)載體PTEBNA，并初步證明了EBNAL穩(wěn)定鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)EBV基因組的作用。Ⅱ

簡介：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文腫瘤特異性增殖腺病毒CNHK500治療乳腺癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名李月敏申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤臨床藥理學(xué)指導(dǎo)教師宋三泰江澤飛20040520軍事『必學(xué)科學(xué)院縮略側(cè)表陋L’論文縮寫HIFHREHTERL、ITRKBKDALBMCSMEMMOIMTTPAGEPBSPCRPFUPRPSAODTETRAPWTAD5英文全稱HYPOXIAINDUCIBLEFACTOR中文全稱缺氧誘導(dǎo)凼子HYPOXIARESPONSEELEMENT缺氧反應(yīng)元件HUAMANTELOMERASEREVERSETRASCRIPTASE人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄哺INVERTEDTERMINALREPEATKILOBASEKILODALTONLURIABERTANIBROTHMULTIPLECLONINGSITE反F∞術(shù)端重復(fù)干堿基對千道爾頓LB培養(yǎng)基多克隆位點(diǎn)MINIMALESSENTIALMEDEUMMEM培養(yǎng)液MULTIPLICITYOFINFECTIONVIRES／CELL34，5DIMETHYTHIAZOL一2一Y12，5一DIPHENYLTETRAZOLIUMBROMIDEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPOLYMERASECHAINREACTIONPLAQUEFORMINGUNITPROGESTERONERECEPTORPROSTATESPECIFICANTIGENOPTICALDENSITY感染復(fù)數(shù)聚丙烯凝膠電泳磷酸鹽緩沖液多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)空斑形成單位孕激素受體的列腺特異性抗原光吸收度TISSUECUITUREINFECTIOUSDOSE5050％TFTR培養(yǎng)感染劑量1IS／EDL’ATE溶液TELOMERICREPEATAMPLIFICATIONPROCOTOL端粒重復(fù)末端擴(kuò)增協(xié)議WILDTYPEADENOVIRUS5型野生型腺病毒2

簡介：中圖分類號密級TACE聯(lián)合抗病毒治療乙肝相關(guān)性肝癌的療效觀察THECLINICALCURATIVEEFFECTOFTRANSCATHETERARTERIALCHEMOEMBOLIZATIONCOMBINEDWITHANTIVIRALTHERAPYINPATIENTSWITHHEPATITISBVIRUSASSOCIATEDHEPATOCELLULARCARCINOMA計(jì)學(xué)位論文37頁表插格7個(gè)圖3幅指導(dǎo)教師馮繼紅教授申請學(xué)位級別碩士學(xué)位劉紅玲學(xué)科專業(yè)內(nèi)科學(xué)培養(yǎng)單位大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院完成時(shí)間二O一五年三月答辯委員會主席關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)大連醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于請?jiān)谝韵孪鄳?yīng)方框內(nèi)打“4“1保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書。2不保密口。作者簽名導(dǎo)師簽名日期年月日日期年月日

簡介：目的探討HBX基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞HEPG2凋亡及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響。方法用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將HBX基因真核表達(dá)載體PCDNA31X轉(zhuǎn)入人肝癌細(xì)胞HEPG2中，建立瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型HEPG2HBXT；G418篩選陽性克隆，反復(fù)傳代，并且至少凍存1次，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型HEPG2HBXS。通過RTPCR、免疫熒光和免疫印跡檢測鑒定HBX基因在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá)。以轉(zhuǎn)染空載體PCDNA31的HEPG2HEPG2PCDNA31細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染的HEPG2細(xì)胞為對照，取瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后24H、48H、72H、96H細(xì)胞及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞，作以下處理行流式細(xì)胞術(shù)分析肝細(xì)胞凋亡率的變化；分別取細(xì)胞標(biāo)本抽提RNA并以ΒACTIN為內(nèi)參，半定量RTPCR法檢測HBXMRNA和凋亡相關(guān)基因FASMRNA、BAXMRNA、BCL2MRNA表達(dá)量的變化。結(jié)果1瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染均成功地將HBX基因轉(zhuǎn)至HEPG2細(xì)胞中，經(jīng)RTPCR、免疫熒光和免疫印跡法證實(shí)了瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中均有HBX基因的表達(dá)。2瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后于24H、48H、72H、96H，HEPG2HBXT與HEPG2PCDNA31T細(xì)胞相比，細(xì)胞凋亡率、FASMRNA表達(dá)量、BAXMRNA表達(dá)量均增高，而BCL2MRNA表達(dá)量均減少，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。3瞬時(shí)轉(zhuǎn)染時(shí)HEPG2HBXT細(xì)胞HBXMRNA表達(dá)量隨時(shí)間延長而逐漸增高P005；而HEPG2HBXS細(xì)胞中BCL2MRNA表達(dá)量較HEPG2PCDNA31S及HEPG2細(xì)胞均增高，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。結(jié)論1本實(shí)驗(yàn)成功建立了瞬時(shí)及穩(wěn)定表達(dá)HBX的HEPG2HBX細(xì)胞模型。2瞬時(shí)轉(zhuǎn)染時(shí)HBX基因可通過上調(diào)FAS、BAX，下調(diào)BCL2的表達(dá)，促進(jìn)HEPG2細(xì)胞凋亡。且隨著HBXMRNA表達(dá)量逐漸增高，對FAS、BAX、BCL2基因的調(diào)節(jié)作用越明顯，其促凋亡效應(yīng)也越明顯。3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時(shí)HBX基因?qū)EPG2細(xì)胞FASMRNA、BAXMRNA的表達(dá)影響不明顯，但能上調(diào)BCL2MRNA的表達(dá)；提示穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時(shí)HBX基因促凋亡能力相對減弱，利于細(xì)胞增殖。4HBXMRNA的表達(dá)量不同時(shí)，其對HEPG2細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因的調(diào)節(jié)作用也不同，表明HBX表達(dá)量與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。

簡介：研究生導(dǎo)師及課題小組成員簡介指導(dǎo)老師史偉云，男，1959年4月生，眼科學(xué)教授、主任醫(yī)師、博士生導(dǎo)師?，F(xiàn)任山東省眼科研究所黨委書記、副所長、山東省眼科醫(yī)院院長，兼任中華醫(yī)學(xué)會眼科學(xué)分會角膜病學(xué)組副組長，是中華醫(yī)學(xué)會眼科學(xué)分會專家委員、“泰山學(xué)者“特聘專家、省有突出貢獻(xiàn)的中青年專家和山東省首屆醫(yī)學(xué)領(lǐng)軍人才，中華眼科雜志等編委。主要從事眼科角膜病、白內(nèi)障、眼免疫學(xué)等的臨床及應(yīng)用基礎(chǔ)研究。作為課題首位人員承擔(dān)國家863重大和重點(diǎn)課題、國家自然科學(xué)基金和山東省自然科學(xué)基金及省攻關(guān)課題等各類課題11項(xiàng)，發(fā)表SCI及國家核心期刊專業(yè)論文145篇，為首獲省科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)L項(xiàng)。合作出版我國首部角膜病學(xué)專著，參編了角膜移植學(xué)等書籍。共帶教博、碩士研究生34名。課題組成員高華，男，1978年生，副主任醫(yī)師，山東省眼科醫(yī)院副院長。王婷，女，1980年生，主治醫(yī)師，山東省眼科醫(yī)院醫(yī)務(wù)部T任。李素霞，女，1980年生，主治醫(yī)師，山東省眼科醫(yī)院角膜病科。一目錄中文摘要II英文摘要V主要縮略詞表VIII前言1日罱1臨床資料與方法3一臨床資料3二裂隙燈檢查3三共焦顯微鏡檢查3四眼前段OCT檢查4五藥物治療4結(jié)果6一裂隙燈下HSK內(nèi)皮型患者的觀察6二共焦顯微鏡下HGK內(nèi)皮型患者的角膜表現(xiàn)LO三ASOCT下HSK內(nèi)皮型患者的角膜表現(xiàn)18討論21結(jié)論26參考文獻(xiàn)27綜I苤28參考文獻(xiàn)35攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果38致謝39

簡介：目的干擾素刺激基因20（ISG20）是一種由I型（IFNΑΒ）或II型干擾素（IFNΓ）誘導(dǎo)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，具有特異的單鏈RNA或DNA的核酸外切酶活性，對于多種RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用。細(xì)胞內(nèi)定位分析發(fā)現(xiàn)ISG20主要位于核小體和CAJAL小體，鑒于核小體是RRNA和核糖體生成的主要場所，CAJAL小體是SNRNA和SNNA生成的主要場所，進(jìn)一步提示ISG20可能通過其核酸外切酶作用影響SNRNA和RRNA的成熟，從而抑制蛋白合成進(jìn)而發(fā)揮抗病毒作用。因此，ISG20的表達(dá)差異及核酸外切酶活性對于不同病毒感染性疾病的發(fā)病、Α干擾素治療的療效及預(yù)后可能具有重要影響。本研究從臨床試驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)兩方面觀察ISG20在Α干擾素治療應(yīng)答組及無應(yīng)答組慢乙肝患者肝臟組織標(biāo)本中的表達(dá)差異與Α干擾素療效的相關(guān)性，并對其所參與的Α干擾素抗乙肝病毒機(jī)制進(jìn)行初步研究。方法本研究首先選取接受Α干擾素治療的慢乙肝患者24人，給予聚乙二醇干擾素Α2A（PEGINTERFERONALPHA2A，派羅欣）抗乙肝病毒治療48周，共隨訪72周，依隨訪結(jié)果分為治療應(yīng)答組及無應(yīng)答組。對其治療前肝穿標(biāo)本行免疫組化檢測觀察ISG20蛋白在各組肝臟組織中的差異表達(dá)并以QRTPCR加以驗(yàn)證。在體外實(shí)驗(yàn)中，我們選擇在HBVDNA全基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株HEPG2形成的HEPG2215細(xì)胞系上進(jìn)行研究，后者是體外研究乙肝病毒對肝細(xì)胞影響的經(jīng)典模型。通過構(gòu)建ISG20過表達(dá)慢病毒載體感染HEPG2215細(xì)胞，觀察ISG20差異表達(dá)對乙肝病毒活性的影響，驗(yàn)證ISG20的抗乙肝病毒作用通過點(diǎn)突變方法構(gòu)建ISG20去核酸外切酶活性的慢病毒載體，探討ISG20發(fā)揮抗乙肝病毒作用的機(jī)制是否依賴外切酶活性。分別用QRTPCR及化學(xué)發(fā)光法檢測細(xì)胞上清液中HBVDNA及乙肝表面抗原HBSAG及E抗原（HBEAG）評價(jià)其抗乙肝病毒活性。結(jié)果免疫組化染色結(jié)果顯示Α干擾素治療應(yīng)答組患者治療前肝組織中ISG20蛋白較無應(yīng)答組及對照組顯著升高且在應(yīng)答組ISG20主要表現(xiàn)為細(xì)胞核高表達(dá)，明顯區(qū)別于無應(yīng)答組及對照組。在體外實(shí)驗(yàn)中，加入Α干擾素處理后，ISG20隨著Α干擾素濃度的增加逐漸升高。野生型ISG20過表達(dá)組可以顯著抑制乙肝病毒，這一結(jié)果與Α干擾素干預(yù)組的結(jié)果相似，并且ISG20過表達(dá)慢病毒與Α干擾素聯(lián)合干預(yù)HEPG2215細(xì)胞后其抑制乙肝病毒作用顯著增強(qiáng)；而突變型ISG20的外切酶活性失活后，ISG20對乙肝病毒的抑制作用消失。此外，行免疫熒光檢測，可見ISG20蛋白高表達(dá)于細(xì)胞核，這一結(jié)果與肝活檢的免疫組化染色結(jié)果相一致，進(jìn)一步證實(shí)ISG20抗乙肝病毒作用主要依賴于其核酸外切酶活性。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)在Α干擾素治療慢乙肝應(yīng)答組及無應(yīng)答組中，ISG20蛋白的表達(dá)水平及細(xì)胞內(nèi)分布存在顯著差異，提示肝組織內(nèi)ISG20蛋白的差異表達(dá)與Α干擾素治療慢乙肝的療效相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，ISG20作為干擾素刺激基因，可由Α干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生，ISG20的表達(dá)差異與Α干擾素抗乙肝病毒作用差異存在顯著的相關(guān)性，并發(fā)現(xiàn)其抗乙肝病毒作用主要依賴于其核酸外切酶活性。