miR-375 靶向Sp1對子宮內膜癌細胞增殖及凋亡的調控作用.pdf

1、目的：
　　探討miR-375對其下游潛在靶點Sp1的靶向作用，及其調控子宮內膜癌細胞增殖及凋亡的分子機制，以期為子宮內膜癌的臨床防治提供新思路。
　　方法：
　?。?）選取20例子宮內膜癌組織及相應癌旁組織，標本均來源于國際和平婦幼保健院，采用RT-PCR檢測組織中miR-375的表達；
　?。?）選取上述組織，采用Western blot檢測其中蛋白Sp1的表達；
　　（3）選取子宮內膜癌細胞系HEC-

2、1A，分別轉染miR-375mimic及control mimic，采用RT-PCR檢測細胞中miR-375表達；
　?。?）選取子宮內膜癌細胞系HEC-1A，分別轉染miR-375mimic及control mimic，采用western blot檢測Sp1蛋白表達；
　?。?）選取子宮內膜癌細胞系HEC-1A，分別轉染miR-375mimic及control mimic，采用MTT法檢測細胞增殖；
　?。?）選取子

3、宮內膜癌細胞系HEC-1A，分別轉染miR-375mimic及control mimic，采用流式細胞儀檢測細胞凋亡；
　?。?）分別將野生型Sp13’-UTR質粒（Sp1-wt）和突變型Sp13’-UTR質粒（Sp1-Mut）與miR-375mimic或control mimic共轉染至子宮內膜癌細胞系HEC-1A，采用雙熒光素酶報告基因檢測細胞熒光素酶活性。
　　結果：
　?。?）與癌旁組織相比較，子宮內膜癌組織中

4、miR-375表達明顯降低（P＜0.05）；
　　（2）與癌旁組織相比較，子宮內膜癌組織中Sp1蛋白表達明顯增高（P＜0.05）。
　?。?）與轉染control mimic相比較，轉染miR-375mimic可使子宮內膜癌細胞HEC-1A中miR-375表達增高（P＜0.05）；
　?。?）與轉染control mimic相比較，轉染miR-375mimic可使子宮內膜癌細胞HEC-1A中Sp1蛋白表達降低（P＜0.

5、05）；
　?。?）與轉染control mimic相比較，轉染miR-375mimic可使子宮內膜癌細胞HEC-1A增殖活性顯著降低（P＜0.01）；
　?。?）與轉染control mimic相比較，轉染miR-375mimic可使子宮內膜癌細胞HEC-1A總凋亡比例顯著增高（P＜0.05）；
　?。?）與轉染control mimic相比較，共轉染miR-375mimic與Sp1-wt可使子宮內膜癌細胞HEC-1