擬南芥藍光雙突變體蛋白質組學分析.pdf

1、植物功能基因組學研究在本世紀發(fā)展十分迅速，然而在轉錄水平提供的基因表達的信息并不能完全確定一個基因的功能。因為基因只是遺傳信息的攜帶者，蛋白質才是生命功能的真正體現(xiàn)者，且在從基因到蛋白質的轉錄及翻譯過程中，在不同機體，不同組織，甚至不同階段都有不同[1]。所以廣范圍研究蛋白質表達和功能模式的蛋白質組學已經(jīng)成為功能基因組學的重要領域。用于蛋白質分離的雙向凝膠電泳技術是蛋白質組研究的核心，而鑒定技術則是蛋白質組技術的支柱。 植物的生

2、長與發(fā)育的調控是通過蛋白質的表達得以實現(xiàn)，而調控受到光照因素的重要影響。雖然高等植物利用可見光進行光合作用，但是它們利用眾多的光受體感受更寬波長的光并做出反映。這些光受體調整控制著種子的萌發(fā)、植物的生物鐘、以及植物生長發(fā)育等[78]。已知CRY介導的藍光調節(jié)植物的光形態(tài)建成反應，抑制下胚軸伸長，促進子葉伸展及調節(jié)開花等功能，因此進一步研究植物藍光信號途徑具有重要意義。本試驗對雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術進行了優(yōu)化。對植物的蛋白的提取采用冷

3、丙酮和三氯乙酸沉淀蛋白質，在蛋白質溶解過程中改進的蛋白質裂解液(加入硫脲)，使蛋白的溶解效率提高。分離得到了擬南芥藍光受體雙突變體cry1cry2與co1-4的蛋白質組高重復性的雙向凝膠圖譜。通過斑點配比，獲得了兩種材料的差異蛋白質點圖譜，并選取51個變化明顯的蛋白質點用原位酶解，抽提蛋白質片段進行MAKDI-TOF-ToF-MS質譜分析，利用肽質量指紋圖數(shù)據(jù)在數(shù)據(jù)庫中檢索，其中包括普通反應酶、過氧化物酶、轉錄因子、綁定蛋白、分子伴侶蛋