RhoGDI2在結直腸癌侵襲、轉移、預后及EMT中的作用研究.pdf

1、目的：
　　鳥苷酸解離抑制因子2（Rho GDP dissociation inhibitor2，RhoGDI2）是RhoGTP酶（Rho GTPases）的調節(jié)因子之一，已被發(fā)現(xiàn)異常表達于多種惡性實體腫瘤之中，在不同類型或不同遺傳背景的腫瘤中的表達及作用截然不同。有關RhoGDI2在結直腸癌中的作用目前仍存在爭議。本實驗通過研究結直腸癌相關組織及細胞株中RhoGDI2的表達，探討其在結直腸癌侵襲、轉移、預后及EMT中的作用，為尋

2、找結直腸癌防治新的靶點提供實驗基礎。
　　方法：
　?。?）運用免疫組化法檢測結直腸癌原發(fā)灶癌組織、癌旁非癌組織、轉移性淋巴結癌組織中RhoGDI2的表達；檢測結直腸癌原發(fā)灶癌組織、癌旁非癌組織中EMT標志物（E-cadherin、Vimentin）的表達。分析RhoGDI2的表達與臨床病理特征及預后的關系，探討RhoGDI2與E-cadherin、Vimentin三者間表達的相關性。
　　（2）運用Real-time

3、 PCR和Western blot檢測人結直腸癌細胞株（SW480、LoVo、HT-29、SW620）中RhoGDI2的表達水平。利用基因轉染技術上調SW480細胞中RhoGDI2表達水平，RNA干擾技術下調SW620細胞中RhoGDI2表達水平，通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，MTT法和流式細胞儀檢測細胞增殖及凋亡的改變，Transwell和劃痕愈合試驗檢驗細胞侵襲和遷移能力的變化，Real-time PCR和Western blot檢測

4、EMT標志物（E-cadherin、Vimentin）表達水平的改變。
　　結果：
　　（1）RhoGDI2在結直腸癌相關組織中存在差異性表達（轉移性淋巴結癌組織＞原發(fā)灶癌組織＞癌旁非癌組織，P＜0.05）。RhoGDI2在結直腸癌組織中的表達與腫瘤的浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、周圍淋巴管浸潤、周圍神經浸潤及TNM分期相關（P＜0.05）。RhoGDI2表達的結直腸癌患者5年生存率顯著降低（P＜0.05），RhoGDI2

5、表達是影響結直腸癌預后的獨立因素之一（P＜0.05）。結直腸癌組織中RhoGDI2與Vimentin的表達呈正相關（r=0.295，P＜0.05），與E-cadherin的表達呈負相關（r=-0.278，P＜0.05）。
　?。?）RhoGDI2的表達水平在結直腸癌SW480、HT-29細胞株中較低，LoVo、SW620細胞株中較高。上調SW480細胞中RhoGDI2表達水平后，細胞形態(tài)由類圓形緊密排列向紡錘形疏松排列轉變；細胞增

6、殖和凋亡水平無明顯改變（P＞0.05）；細胞侵襲和遷移能力增強（P＜0.05）；細胞中E-cadherin表達水平下降（P＜0.05），Vimentin表達水平升高（P＜0.05）。下調SW620細胞中RhoGDI2表達水平后，細胞形態(tài)由紡錘形疏松排列向類圓形緊密排列轉變；細胞增殖和凋亡水平無明顯改變（P＞0.05）；細胞侵襲和遷移能力減弱（P＜0.05）；細胞中E-cadherin表達水平升高（P＜0.05），Vimentin表達水平