α-螺旋抗癌肽L-K6對人乳腺癌MCF-7細胞的內(nèi)化機制研究.pdf

1、L-K6是中國林蛙皮膚抗菌肽Temporin-1 CEb的改造肽。本實驗室前期研究表明，L-K6對多種乳腺癌細胞的增殖有顯著的抑制作用。跨膜電位檢測顯示L-K6對乳腺癌MCF-7的細胞膜無明顯的去極化作用，對細胞膜通透性影響較小并且對細胞膜沒有明顯的破壞作用。這些結(jié)果提示L-K6對乳腺癌MCF-7細胞的作用靶點可能是胞內(nèi)物質(zhì)而非細胞膜。本論文初步探究L-K6進入細胞膜方式及作用機制。
　　首先，我們利用激光共聚焦顯微鏡和超高分辨率

2、顯微鏡研究L-K6對乳腺癌MCF-7細胞的細胞膜、細胞骨架、細胞核形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果顯示L-K6作用1小時，MCF-7細胞膜基本保持完整，細胞骨架形態(tài)清晰，但是細胞核熒光減弱，并隨L-K6濃度增大核熒光減弱程度增加。說明L-K6以某種方式進入細胞后，作用于細胞核。其次，我們利用流式細胞儀、熒光酶標(biāo)儀、超高分辨率顯微鏡研究L-K6的入膜方式。檢測結(jié)果顯示，用內(nèi)吞抑制劑甲基-β-環(huán)糊精(M-β-CD)、阿米洛利(EIPA)、氯丙嗪(CPZ

3、)、細胞松弛素D(CyD)處理細胞后，F(xiàn)ITC-L-K6的內(nèi)化量均有不同程度的減少，證明L-K6主要以內(nèi)吞的方式進入MCF-7細胞，其中細胞松弛素D(CyD)對L-K6內(nèi)化量的影響最為顯著。為探究L-K6內(nèi)化過程的能量依賴性，我們進行了低溫試驗，實驗結(jié)果顯示，在4℃低溫環(huán)境中L-K6的內(nèi)化量與37℃環(huán)境中L-K6的內(nèi)化量相比顯著降低，說明L-K6的內(nèi)化具有能量依賴性。
　　L-K6是陽離子抗菌肽，其首先通過靜電作用與MCF-7細胞