Syncytin-1在子宮內膜異位癥中的表達及其靜觀遺傳學調控.pdf

1、分類號：R7302密級：學位類別：科學學位日專業(yè)學位口圈學校代碼：10062學號：20071100學科門類：醫(yī)學又肄鼉斜矢量博士學位論文DOCTORALDISSERTATION論文題目：Syncytin1在子宮內膜異位癥中的表達及其表觀遺傳學調控TITLETheexpressionandepigeneticregulationofsyncytin1inendometriosis一級學科：If6i床醫(yī)學二級學科：腫瘤學論文作者：周洪淵指導

2、教師：李強教授導師組成員：江世文教授天津醫(yī)科大學研究生院二。一。年五月天津醫(yī)科大學博士學位論文中文摘要目的：確定syncytin1在子宮內膜異位癥及子宮內膜異位癥患者子宮內膜中的表達，探討syncytin1在子宮內膜異位癥中的意義。通過檢測基因組總體甲基化的水平，明確總體甲基化和syncytin1表達水平之間的關系，探討總體甲基化對于syncytin1表達調控的影響。啟動子區(qū)CpG島甲基化程度和syncytin1表達之間的關系，明確其對

3、于syncytin1表達調控的作用。探討甲基轉移酶3b亞型和syncytin一1表達之間的關系，明確甲基轉移酶3b亞型和syncytin1啟動子區(qū)CpG島甲基化之間的相關性，探討甲基轉移酶3b亞型在syncytin1表達調控過程中的作用。材料和方法：從組織中提取RNA，通過反轉錄獲得cDNA，然后應用實時定量PCR和免疫組化的方法，分別檢測syncytinq在子宮內膜異位癥及子宮內膜異位癥患者子宮內膜中的mRNA水平和蛋白水平，子宮內膜

4、異位癥患者的子宮內膜為對照組。選擇LINE1作為代表總體甲基化的基因，以重亞硫酸氫鹽轉化后的基因組DNA為模板，用LINE1的引物做PCR，然后用聯(lián)合亞硫酸氫鹽限制分析(combinedbisulfitcrestrictionanalysis，COBRA)的方法檢測LINE1的甲基化水平。為了在蛋白水平檢測總體甲基化的程度，做5mC的免疫組化染色。以重亞硫酸氫鹽轉化過的基因組DNA為模板，行syncytin1啟動子區(qū)的巢式PCR，通過瓊

5、脂糖凝膠電泳將PCR產(chǎn)物分離純化出syncytin1的DNA，然后將純化DNA連入空質粒，轉染到感受態(tài)細胞，在LB培養(yǎng)基中37“C孵育14小時，提取質粒DNA，并做syncytin1啟動子區(qū)的DNA測序，對比兩組CpG島的甲基化程度和位點。為了進一步探討啟動子區(qū)CpG島的甲基化和syncytin1表達之間的關系，再用Cobra的方法檢測兩組CpG島的甲基化比例。從組織中提取RNA，通過反轉錄獲得cDNA，然后以cDNA為模板，行甲基轉移

6、酶3b亞型的實時一定量PCR。結果：子宮內膜異位癥中的mRNA表達水平，是對照組mRNA水平的19倍，免疫組化染色顯示，子宮內膜異位癥中syncytin1的蛋白表達水平，亦高于對照組的蛋白水平。Cobra的結果顯示，在子宮內膜異位癥和對照組，LINE1的甲基化比例分別為75％和74％，兩組之間沒有明顯差異，而免疫組化也表明，5mC的染色在兩組之間沒有明顯差異。測序的結果顯示，子宮內膜異位癥和對照組syncytin一1啟動子區(qū)CpG島甲基