陰道毛滴蟲內(nèi)雙鏈RNA病毒的寄生及其對(duì)陰道毛滴蟲相關(guān)特性影響的研究.pdf

1、目的：
　　 對(duì)我國河南地區(qū)陰道毛滴蟲臨床分離株進(jìn)行陰道毛滴蟲病毒的檢測。研究陰道毛滴蟲病毒的寄生對(duì)陰道毛滴蟲的臨床致病性、甲硝唑耐藥性、與人型支原體的共生及基因多態(tài)性的影響。
　　 方法：
　　 1．將收集到的30株陰道毛滴蟲分離株在無菌TYM(trypticase—yeastextract—maltose)培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)，達(dá)到純培養(yǎng)后，用同時(shí)提取DNA和RNA的方法提取蟲體的總核酸，1％的瓊脂糖凝膠對(duì)其進(jìn)

2、行電泳分析，初步篩選陰道毛滴蟲病毒陽性株。將已提取的陰道毛滴蟲病毒陽性株總核酸與核酸酶進(jìn)行反應(yīng)，再進(jìn)行1％的瓊脂糖凝膠電泳分析鑒定。
　　 2．對(duì)收集到的陰道毛滴蟲病患者的臨床癥狀進(jìn)行分析，根據(jù)無癥狀、輕度癥狀、中度癥狀、重度癥狀四級(jí)分法，判定陰道毛滴蟲病毒陽性株和陰性株臨床癥狀的輕重程度。用兩樣本秩和檢驗(yàn)的方法對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，研究陰道毛滴蟲病毒對(duì)滴蟲的臨床致病性有無影響。
　　 3．用連續(xù)稀釋法測量30株陰道毛滴蟲

3、臨床分離株的甲硝唑最小致死濃度(minimum lethal concentration，MLC)，對(duì)比陰道毛滴蟲病毒陽性株和陰性株最小致死濃度，所得數(shù)據(jù)用SPSS16．0進(jìn)行處理，分析陰道毛滴蟲病毒對(duì)甲硝唑耐藥性有無影響。
　　 4．用陰道毛滴蟲人型支原體擴(kuò)增的特異性引物，對(duì)30株陰道毛滴蟲分離株進(jìn)行人型支原體的檢測，分析陰道毛滴蟲病毒的寄生是否影響人型支原體與陰道毛滴蟲的共生。
　　 5．用陰道毛滴蟲Tvmarl基因

4、位置擴(kuò)增的特異性引物，通過MGE—PCR方法對(duì)30株陰道毛滴蟲臨床分離株進(jìn)行Tvmarl的位置擴(kuò)增，應(yīng)用MEGA5．0軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化圖譜繪制，分析蟲體的基因多態(tài)性。
　　 結(jié)果：
　　 1．30株陰道毛滴蟲分離株總核酸進(jìn)行電泳，其中有6株(Tv5、Tv10、Tv13、Tv17、Tv22、Tv23)滴蟲除了有基因組DNA，還有一條5．5 kbp的病毒帶，為陰道毛滴蟲病毒陽性株。
　　 2．陰道毛滴蟲病毒陽性株的臨

5、床致病性輕于陰道毛滴蟲病毒陰性株(Zc=—3．428，P<0．05)。
　　 3．陰道毛滴蟲病毒陽性組的甲硝唑MLC值(5．68±3．588)μg/ml小于陰道毛滴蟲病毒陰性組的甲硝唑MLC值(24．27±20．899)μg/ml，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2．143，P<0．05)，陰道毛滴蟲病毒陽性株對(duì)甲硝唑比較敏感。
　　 4．人型支原體不易與有陰道毛滴蟲病毒寄生的陰道毛滴蟲株共生(x2=0．000，P<0．05