hplc-基礎(chǔ)知識(shí)ppt課件

1、HPLC 基礎(chǔ)知識(shí),The Basic knowledge of HPLC急診組 楊旭峰,目錄,色譜分析法簡(jiǎn)介色譜法的分類(lèi)HPLC的特點(diǎn)及應(yīng)用領(lǐng)域HPLC的分類(lèi)HPLC相關(guān)的基本術(shù)語(yǔ)HPLC的相關(guān)理論,,HPLC的定性分析HPLC的定量分析HPLC儀器的組成 輸液泵 檢測(cè)器 色譜柱 進(jìn)樣器 工作站,,P30的基本操作HPLC方法的建立液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題及其對(duì)策液相色譜容易出

2、現(xiàn)問(wèn)題的部件儀器的維修和保養(yǎng),色譜分析法簡(jiǎn)介,色譜法是一種重要的分離分析方法，它利用需被分離的各種物質(zhì)在互不相溶的兩相中分配系數(shù)的微小差異進(jìn)行分離。當(dāng)兩相相對(duì)移動(dòng)時(shí)，使被測(cè)物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行反復(fù)多次分配，使原來(lái)微小的差異累加產(chǎn)生了很大的效果，形成差速遷移，使各組分在柱內(nèi)移動(dòng)的同時(shí)逐漸分離，以達(dá)到分離，分析及測(cè)定其各種物理化學(xué)參數(shù)的目的。,色譜的由來(lái),俄國(guó)植物學(xué)家茨維特（Tswett）1906年，他將從植物色素提取的石油醚提取液倒入一根

3、裝有碳酸鈣的玻璃管頂端，然后用石油醚淋洗，結(jié)果使不同色素得到分離，在管內(nèi)出現(xiàn)色帶，色譜一詞由此而來(lái)。,色譜法的分類(lèi),1.按兩相狀態(tài)分類(lèi)2.按分離機(jī)理分類(lèi)3.按固定相得外型分類(lèi),1.按兩相狀態(tài)分類(lèi),氣體為流動(dòng)相：氣相色譜（GC） 固定相是固體吸附劑：氣固色譜（GSC） 固定相是固定液（附著在惰性載體上的一薄層有機(jī)化合物液體）：氣液色譜（GLC）液體為流動(dòng)相：液相色譜（LC） 液固色譜（LSC） 液液色

4、譜（LLC）,,隨著色譜分析的發(fā)展，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將固定液鍵合到載體表面，這種化學(xué)鍵合固定相的色譜稱(chēng)為：化學(xué)鍵合相色譜（CBPC）超臨界流體為流動(dòng)相的色譜為超臨界流體色譜（SFC）,2.按分離機(jī)理分類(lèi),吸附色譜法：利用組分在吸附劑（固定相）上的吸附能力強(qiáng)弱不同而得以分離的方法。分配色譜法：利用組分在固定液（固定相）中溶解度不同而達(dá)到分離的方法。離子交換色譜法：利用組分在離子交換劑（固定相）上的親和力大小不同而達(dá)到分離的方法。凝膠色

5、譜：利用分子大小同，在多孔固定相中的選擇滲透而達(dá)到分離的方法。,,親和色譜法：利用不同組分與固定相（固定化分子）的高專(zhuān)屬性親和力進(jìn)行分離的技術(shù)。常用于蛋白質(zhì)的分離。,3.按固定相的外型分類(lèi),柱色譜：固定相裝于柱內(nèi)平板色譜：固定相呈平板狀，又可分為薄層色譜和紙色譜,4.按照展開(kāi)程序分類(lèi),按照展開(kāi)程序的不同，分為：洗脫法、頂替法和迎頭法洗脫法（沖洗法）：將樣本加到色譜柱頭上用吸附或溶解能力比樣本組分弱得多的氣體或液體作沖洗劑各組分

6、被沖洗劑帶出的向后次序不同而分離，流出曲線如后圖：,,,這種方法能使樣本各組分獲得良好的分離，色譜峰清晰，此外，除去沖洗劑后，可獲得純度較高的物質(zhì)。目前這種方法是色譜法中最常用的一種方法。,A,B,,頂替法：將樣本加到色譜柱頭后，在惰性流動(dòng)相中加入對(duì)固定相得吸附或溶解能力比所有樣本組分強(qiáng)的物質(zhì)為頂替劑（或直接用頂替劑作流動(dòng)相），通過(guò)色譜柱，將各組分按吸附或溶解能力的強(qiáng)弱順序，依次頂替出固定相。 很明顯，吸附或溶解能力最弱得組分