麻疹風疹腮腺炎水痘標本采集處理運送李芳彩

1、麻疹/風疹/腮腺炎/水痘標本采集、處理、保存及運送,李芳彩湖南省疾病預防控制中心微生物檢驗科2012.11.29,主要內(nèi)容,方案中關于標本的要求病毒感染過程與機體免疫反應操作流程注意事項,每個散發(fā)病例都要采集血清學標本來確診病例；出疹后3天內(nèi)采集的血標本檢測麻疹IgM抗體陰性或可疑的病例，應在出疹后4-28天采集第2份血標本；對每起麻疹暴發(fā)疫情至少采集5例暴發(fā)早期病例血清學標本（5例以下應全部采集）；實驗室血清

2、檢測結果7天內(nèi)（從標本采集至網(wǎng)上結果錄入）上報至麻疹監(jiān)測信息系統(tǒng)。,麻疹消除前后血清學監(jiān)測工作的要求,基因分型需要在有資質的實驗室進行 –通過盲樣考核 每個散發(fā)病例都要采集病原學標本鑒定病毒來源---消除階段；要在接觸病例的第一時間采集標本；每次爆發(fā)要針對每個可能的傳播鏈都要采集標本，以鑒別每個傳播鏈的傳播來源；各省要提高散發(fā)和暴發(fā)疫情病原學標本采集率、病毒分離率和基因型別的及時鑒定率-引入分子生物學方法；強調病毒分離的重要性

3、：仍要進行病毒分離！各項指標嚴格按照麻疹監(jiān)測方案執(zhí)行：病毒株的及時上送；有能力進行基因分型的省份，須及時將原始序列峰圖結果上報NML, 同時按月上送病毒分離物至NML進行復核；,麻疹消除前后病毒學監(jiān)測工作的要求,每年采集10份左右典型散發(fā)病例病原學標本，并同時采集血清學標本，分離分析野病毒株特征，獲得基因特征本底資料每次爆發(fā)從爆發(fā)的早期和晚期采集5－10份標本，分析野毒株，監(jiān)測它們的分布和流行,腮腺炎、水痘病毒學監(jiān)測工作的要求

4、,沒有并發(fā)癥的首次感染麻疹病毒的過程,急性麻疹病毒感染的免疫反應,典型風疹病毒感染的臨床特征——疾病發(fā)生的時間進程,典型風疹病毒感染的免疫反應,麻疹/風疹控制和消除階段中實驗室的作用,由于出疹后3-5天內(nèi)采集的標本病毒分離率較高，因此用于病毒分離標本的采集不能等到對疑似病例進行實驗室證實之后才開始 ，建議在首次接觸病人時同時采集血清學標本、咽拭子標本和尿液標本,標本采集的記錄,所有采集到的標本都要有記錄，最好使用標準化實驗室表格。下表

5、中提供了一個標準的實驗室表格范例。標準的實驗室表格應至少包含以下信息：唯一的識別碼（采用統(tǒng)一格式）；實驗室編碼；病人姓名；年齡（或者用標準格式標明出生日期）；省份（或地區(qū)）；縣或區(qū)；國家編碼；麻疹和（或）風疹疫苗的最后接種日期；出疹日期；病人是否符合病例定義？標本類型；標本采集日期；標本送出日期。,用于抗體檢測的血清學標本采集與處理,采集方法與采集量：靜脈穿刺取血收集于無菌管中，兒童和成人取5ml，嬰兒取2ml

6、，幼兒取適量 處理：全血在進行血清分離前可置4–8 ℃保存24小時，但不可冷凍保存。待全血凝集后，于1500rpm/20分鐘分離血清 ，在無菌條件下，將血清移至外螺旋蓋帶墊圈的無菌管中，避免吸到紅血球保存和運輸：無菌分離的血清在運輸之前應置于4–8℃保存，保存時間不能超過7天。如果需要保存更長時間，則應置于-20℃或更低溫度冷凍保存，運送過程中要放置冰袋保溫。 要求保存所有血清學標本以備復核,咽拭子標本采集,避免在進食后兩小時內(nèi)取

7、標本；患者對光而坐，頭部上仰口張大；口腔進入伸向鼻咽部，到達咽后壁涂擦取標本；用無菌棉簽適度用力擦拭腭弓兩側、咽、扁桃體；注意棉簽不觸及其他部位；在酒精燈火焰上消毒試管口；棉簽插入試管、塞緊；采完后迅速把拭子放到有旋轉蓋的并裝有病毒保存液的帶墊圈的螺口塑料凍存管中,在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋。在48小時內(nèi)冷藏運輸?shù)綄嶒炇遥?-8℃）。,不同病毒咽拭子標本采集的要求,麻疹病人可采集柯氏斑于同一病毒采樣管中，以提高病毒分

8、離陽性率；腮腺炎病人可通過咬另一根干凈棉簽后收集唾液于同一病毒采樣管中，以提高病毒分離陽性率；水痘—帶狀皰疹病人可通過無菌采集病人皰疹液于同一病毒采樣管中，以提高病毒分離陽性率。,采咽拭子的器材和容器,尿液標本采集,收集10-50ml中段尿液標本于無菌離心管中，注意不收集晨尿；1500rpm，4℃離心5分鐘，沉淀細胞。（最好在收集標本后24小時內(nèi)離心）；棄上清，并用2-3ml病毒運輸液重懸沉淀，并保存在帶螺旋蓋的凍存管中

9、，-70℃保存；在離心重懸沉淀前不要凍融尿液標本。備注：風疹病毒不適宜,病原學標本的處理與保存,市級實驗室收到病原學標本（鼻咽拭子、尿液重懸液）后，首先加入2%三抗處理，然后將標本分成3份，1份約200ul用于核酸檢測，1份約1ml用于病毒分離，1份約2ml用于保存用于病毒分離和核酸檢測的標本應盡快進行檢測 24小時內(nèi)能檢測的標本，置于4℃保存； 不能于24小時內(nèi)接種的標本，置于-70℃或以下保存。注：標本運送

10、期間應避免反復凍融。,病原學標本送檢的時限要求,能承擔病毒分離工作的麻疹實驗室在接到標本后28天內(nèi)完成病毒分離工作，分離到的毒株在14天內(nèi)送中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所麻疹實驗室（以下簡稱國家麻疹實驗室）進行病毒基因定型；不能承擔病毒分離工作的實驗室在接到標本后7天內(nèi)將所有處理好的病原學標本送至湖南省疾病預防控制中心麻疹實驗室進行病毒分離，并完整填寫標本送檢單，附上核酸檢測結果；特殊標本，如國外輸入病例、暴發(fā)疫情病例、媒

11、體關注、社會影響較大的病例、疫苗相關病例等，在標本采集后要快速送檢（一般要求為標本采集后48小時內(nèi)）至省麻疹實驗室進行核酸檢測和病毒分離。省麻疹實驗室在完成核酸檢測后進行病毒分離和標本上送至國家麻疹實驗室進行病毒基因定型,標本送檢的生物安全要求,標本放入專用運輸箱內(nèi)，四周放置冰袋，空隙部分用具有吸水和緩沖性能的材料充填，所有運送容器外必須具有生物危險標識。標本的運送應遵循《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務院第424號令）和衛(wèi)