動(dòng)物源性成分

1、飼料中動(dòng)物源性成分檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展摘要:飼料安全與動(dòng)物生產(chǎn)、環(huán)境污染和人類(lèi)健康密切相關(guān)。動(dòng)物廢棄物進(jìn)入飼料行業(yè)曾經(jīng)彌補(bǔ)了蛋白質(zhì)飼料不足的缺口但卻帶來(lái)了新的問(wèn)題。飼料中動(dòng)物源性成分的定性或定量檢測(cè)技術(shù)已成為國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)，適用于各種樣品、基于各種原理的方法和技術(shù)被開(kāi)發(fā)出來(lái)。本文以組織學(xué)特征為基礎(chǔ)的顯微鏡分析方法、以蛋白質(zhì)和DNA為基礎(chǔ)的免疫學(xué)和PCR分析方法、高效液相色譜法和近紅外光譜法在動(dòng)物源性飼料組分中的研究應(yīng)用進(jìn)展等方面做了綜述并

2、對(duì)其發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行討論。飼料安全已與動(dòng)物生產(chǎn)、環(huán)境污染和人類(lèi)健康密切相關(guān)。動(dòng)物源性副產(chǎn)品因富含蛋白質(zhì)、鈣、磷等營(yíng)養(yǎng)成分而被應(yīng)用于畜禽飼料中但現(xiàn)有的證據(jù)表明在動(dòng)物飼料中添加未經(jīng)加熱處理牛源性飼料或感染過(guò)癢病因子的牛(羊)肉肉骨粉(MBM)后能夠引發(fā)和傳播瘋牛病(BSE)。我國(guó)于1999、2001和2004年先后下發(fā)了關(guān)于對(duì)動(dòng)物源性飼料生產(chǎn)和管理的相關(guān)條例主要對(duì)反芻動(dòng)物源性飼料組分、MBM、肉粉、骨粉、血粉、動(dòng)物內(nèi)臟干粉和動(dòng)物廢棄物等使用做了

3、嚴(yán)格的規(guī)定。目前關(guān)于飼料中動(dòng)物源性成分檢測(cè)主要以樣品的組織學(xué)特性和品種特異性的生物標(biāo)記物(如蛋白質(zhì)、DNA和其他生物大分子等)為對(duì)象其中PCR技術(shù)發(fā)展迅速已逐步被世界各國(guó)采用。但由于動(dòng)物源性飼料組成上的復(fù)雜性單一的PCR技術(shù)仍不能克服耗時(shí)、效率低和假陽(yáng)性等問(wèn)題。因此研究并建立一種(套)快速、靈敏、可靠的動(dòng)物源性飼料檢測(cè)技術(shù)對(duì)于提高飼料質(zhì)量、防止飼料摻假、控制進(jìn)口飼料安全和制訂相關(guān)飼料法規(guī)等均具有重要意義。本文中動(dòng)物源性成分是指動(dòng)物組織以

4、及蛋和奶，包括肉類(lèi)及其制品(含動(dòng)物臟器)、水生動(dòng)物產(chǎn)品等，檢測(cè)技術(shù)是指上述成分中蛋白質(zhì)和DNA等具有種間特異性物質(zhì)的物種鑒定和含量分析技術(shù)。該技術(shù)已成為保護(hù)消費(fèi)者權(quán)益和安全的重要技術(shù)手段。動(dòng)物源性成分檢測(cè)技術(shù)通常建立在對(duì)樣品蛋白質(zhì)、DNA、脂肪酸等分子結(jié)構(gòu)、序列或組成特異性分析的基礎(chǔ)上。涉及的技術(shù)手段包括酶聯(lián)免疫、聚合酶鏈?zhǔn)角蓊?lèi)還是魚(yú)類(lèi)肌肉組織一般都被破壞成短的纖維其寬度依據(jù)處理的方法和動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)狀況而不同。動(dòng)物肌纖維一般沒(méi)有各自的明顯

5、特征肌纖維的出現(xiàn)與否是判定飼料中是否出現(xiàn)動(dòng)物源性成分的重要依據(jù)。飼料中毛發(fā)、羽毛、蛋殼、魚(yú)刺、魚(yú)鰓的檢出可以進(jìn)一步確定飼料中是否出現(xiàn)動(dòng)物源性成分。歐盟已嘗試通過(guò)飼料顯微鏡學(xué)方法來(lái)進(jìn)行定量測(cè)定。飼料顯微鏡學(xué)方法具有樣品制備量少、設(shè)備便宜、簡(jiǎn)單易行的優(yōu)點(diǎn)但該方法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力對(duì)技術(shù)人員的要求高結(jié)果與試驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)相關(guān)性很大。不同樣品中所含有動(dòng)物源性成分的來(lái)源多樣低倍鏡下顏色的重疊比較大高倍鏡下骨陷窩的重疊性比較大。這要求顯微鏡分析師達(dá)到較高的專(zhuān)業(yè)

6、水平。因此迫切需要建立一套新的、合適的鑒定標(biāo)準(zhǔn)。1基于蛋白特異性的檢測(cè)技術(shù)1.1蛋白分子立體結(jié)構(gòu)特異性基于蛋白的鑒別技術(shù)大多以蛋白分子立體結(jié)構(gòu)特異性為基礎(chǔ)，應(yīng)用抗原抗體特異性結(jié)合的原理建立，通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記信號(hào)的有無(wú)或強(qiáng)弱來(lái)判斷目標(biāo)成分的有無(wú)或多少。該類(lèi)技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、特異性好、不需要大型儀器設(shè)備的優(yōu)點(diǎn)，容易操作，可以進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)，其核心技術(shù)是特異性抗原和抗體的篩選與制備。骨骼肌中的肌鈣蛋白I(troponinI，tnI)具有高特異性和

7、熱穩(wěn)定性，是理想的抗原之一，Liu等[1]（LIULihuaCHENFurchiDSEYJLetal.SensitivemonoclonalantibodybasedswichELISAfthedetectionofpcineskeletalmuscleinmeatfeedproducts[J].FoodScience200671(1):M1M6.）以豬tnI為抗原制備了兩種單克隆抗體Mab8F10和Mab5H9，Mab8F10能夠和所

8、有的哺乳動(dòng)物tnI而Mab8F10只和豬tnI特異性反應(yīng)，用該組抗體開(kāi)發(fā)的抗體夾心法能夠檢出雞肉和牛肉中摻雜的豬肉成分(檢出限分別為0.05%和0.1%)、檢出大豆蛋白基料飼料中和肉骨粉中的肉成分(檢出限分別為0.05%和1%)，而且樣品經(jīng)過(guò)132℃、2h的高溫處理后不影響檢測(cè)效果?；诘鞍追肿恿Ⅲw結(jié)構(gòu)特異性的檢測(cè)方法也有局限性，蛋白抗原決定簇的立體結(jié)構(gòu)會(huì)受到多種環(huán)境因素影響而改變，當(dāng)檢測(cè)加工過(guò)的成分時(shí)其特異性和準(zhǔn)確性會(huì)大打折扣，此時(shí)需