口腔微生物菌群結(jié)構(gòu)與腸道益生菌共培養(yǎng)研究.pdf

1、自然界中的微生物與人類(lèi)的生活息息相關(guān)。無(wú)論是歷史悠久的食醋、醬油、酒精飲料的釀造，還是現(xiàn)代工業(yè)中的微生物采礦、環(huán)境治理等都與微生物有著緊密的關(guān)系?？茖W(xué)技術(shù)及醫(yī)療診斷的發(fā)展使人們認(rèn)識(shí)到，人體內(nèi)的微生物與個(gè)體健康也有著千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系，人體微生態(tài)如口腔微生態(tài)、腸道微生態(tài)的失衡可能導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生和發(fā)展。人體微生物的群落結(jié)構(gòu)又受到生活環(huán)境與生活習(xí)慣的影響。
　　生物信息學(xué)分析軟件QIIME(Quantitative Insights

2、Into Microbial Ecology)和實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)(RT-PCR)是比較成熟的研究微生物群落的工具和方法。本實(shí)驗(yàn)基于QIIME和RT-PCR分別對(duì)口腔微生物和腸道益生菌做了不同方面的研究，旨在探索飲食習(xí)慣與口腔微生物群落結(jié)構(gòu)的關(guān)系，了解飲食習(xí)慣對(duì)人體健康的潛在影響，以及探索腸道益生菌共培養(yǎng)生長(zhǎng)的生長(zhǎng)特性的研究方法，為之后將共培養(yǎng)范圍擴(kuò)展至全腸道微生物，模擬體內(nèi)環(huán)境進(jìn)行益生菌互作或腸道微生物互作研究打下基礎(chǔ)。主要

3、內(nèi)容如下:
　　1、通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查，以大學(xué)生群體為研究對(duì)象，選取符合實(shí)驗(yàn)要求的36名受試者提供唾液樣本。提取唾液樣本中微生物DNA并用Illumina測(cè)序平臺(tái)測(cè)序。使用Linux服務(wù)器搭建QIIME分析平臺(tái)，配置分析環(huán)境，使用QIIME軟件對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行一系列生物信息學(xué)分析。36名受試者分為葷食組（A組）19人，素食組（B組）17人。
　　在經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析后，得出結(jié)論:口腔唾液中Corynebacterium、Strept

4、ococcus等潛在致病或條件致病菌的屬與常吃葷食呈正相關(guān)，而Peptostreptococcus、Eubacterium等無(wú)害菌屬與常吃葷食呈負(fù)相關(guān)。實(shí)驗(yàn)證明葷素飲食習(xí)慣與口腔微生物群落結(jié)構(gòu)存在關(guān)聯(lián)。
　　2、篩選出鼠李糖乳桿菌GG株(Lactobacillus rhamnosus GG，LGG)、動(dòng)物雙歧桿菌第12號(hào)菌株（Bifidobacterium animalis subsp.Lactis Bb-12，BB12）、尼氏大

5、腸桿菌1917菌株(Escherichia coli Nissle1917)共3株益生菌參與益生菌共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)對(duì)生長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)的分析，確立共培養(yǎng)條件、設(shè)計(jì)共培養(yǎng)方案，使用麥康凱培養(yǎng)基對(duì)共培養(yǎng)體系中Nissle1917進(jìn)行篩選培養(yǎng);以L(fǎng)GG的pheS基因?yàn)閮?nèi)參基因，luxS基因?yàn)閷?shí)驗(yàn)基因進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)。
　　通過(guò)對(duì)Nissle1917菌株的共培養(yǎng)篩選實(shí)驗(yàn)與LGG菌株的共培養(yǎng)RT-PCR實(shí)驗(yàn)，得出結(jié)論:在共培養(yǎng)