M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移影響的研究.pdf

1、【目的】
　　1.在人結(jié)腸腫瘤的手術(shù)切除標(biāo)本中檢測(cè)巨噬細(xì)胞及 M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的分布；
　　2.從誘導(dǎo)分化成熟的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞獲得其培養(yǎng)上清，提取胞外體；
　　3.在體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)中分別探索 M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞來(lái)源胞外體能否促進(jìn)結(jié)腸腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移；
　　4.結(jié)合胞外體中miRNAs的Micro Array測(cè)序結(jié)果，進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探索M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞來(lái)源胞外體對(duì)結(jié)腸腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的

2、可能機(jī)制。
　　【方法】通過免疫組化及石蠟切片免疫熒光檢測(cè)人結(jié)腸癌標(biāo)本中巨噬細(xì)胞及M2型巨噬細(xì)胞的分布。將人單核細(xì)胞用GM-CSF、IL-4、IL-13處理，誘導(dǎo)分化為M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，用免疫熒光檢測(cè)M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志CD163表達(dá)情況。培養(yǎng)M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，分離、提取其條件培養(yǎng)基中的胞外體,并通過電鏡、流式細(xì)胞學(xué)及western blot進(jìn)行鑒定。研究M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞來(lái)源的胞外體對(duì)于結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞系遷移、侵

3、襲、轉(zhuǎn)移的影響，建立裸鼠結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移瘤模型，觀察M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞來(lái)源的胞外體對(duì)結(jié)腸腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。通過Micro Array檢測(cè)胞外體中胞外體的表達(dá)，找出其中具有促癌作用的miRNA，通過Real-time PCR、Western Blot及相關(guān)效應(yīng)的阻遏實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果。
　　【結(jié)果】
　　1.巨噬細(xì)胞及 M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞主要存在于結(jié)腸腫瘤的間質(zhì)中，且高分化腺癌的腫瘤中，M2的比例較低，較低分化的結(jié)腸腫

4、瘤中，M2的比例較高；
　　2. M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可以分泌胞外體，并可以進(jìn)入到結(jié)腸癌細(xì)胞中；
　　3.通過體外實(shí)驗(yàn)證明 M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)結(jié)腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移是部分依賴于胞外體的；
　　4.通過裸鼠肺轉(zhuǎn)移模型證明 M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)結(jié)腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移是部分依賴于胞外體的；
　　5.通過 Micro Array檢測(cè)到胞外體中有2個(gè) microRNA表達(dá)較高，而這群microRNA可以通過多條信號(hào)通路