大豆三羥異黃酮通過(guò)PPAR調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的研究.pdf

1、目的:大豆異黃酮是大豆等豆科植物的次級(jí)代謝產(chǎn)物，三羥異黃酮(Gentistein，Gen)是大豆異黃酮的重要活性組成部分，研究發(fā)現(xiàn)其具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗癌、抗氧化等多種生物學(xué)功能。在脂質(zhì)代謝中表現(xiàn)出調(diào)控代謝酶表達(dá)與活性的生理功能。本論文通過(guò)細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)來(lái)研究三羥異黃酮對(duì)脂質(zhì)代謝的調(diào)控作用，以及Gen對(duì)磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)含量的影響，研究過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)在Gen調(diào)控脂蛋白酯酶(LPL)基因表達(dá)中的作

2、用與激活途徑的機(jī)制規(guī)律，為大豆異黃酮在營(yíng)養(yǎng)保健、預(yù)防代謝綜合癥、臨床藥理等領(lǐng)域的深入應(yīng)用研究提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用正常人肝細(xì)胞L-02、肝癌細(xì)胞HepG2、Hep3b和小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L14種細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，細(xì)胞分為空白組、模型組、Gen實(shí)驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照組(PPARs激動(dòng)劑);模型組采用油酸(OA)誘導(dǎo)建立對(duì)照模型;利用MTT法檢測(cè)不同OA誘導(dǎo)對(duì)Gen及PPAR激動(dòng)劑處理的人正常肝細(xì)胞L-02及肝癌細(xì)胞He

3、pG2、Hep3b和小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1活性，研究不同濃度OA對(duì)四種細(xì)胞在Gen及PPAR激動(dòng)劑處理下的不同作用效果以確定OA誘導(dǎo)最佳劑量;檢測(cè)OA處理不同時(shí)間后四種細(xì)胞培養(yǎng)液中ALT及AST的含量以確定OA作用的最佳時(shí)間，以油酸誘導(dǎo)最佳劑量、時(shí)間等參數(shù)來(lái)建立脂肪細(xì)胞模型;檢測(cè)Gen及PPAR激動(dòng)劑對(duì)油酸誘導(dǎo)的脂肪化細(xì)胞中甘油三酯(TG)的含量，對(duì)Gen及PPAR激動(dòng)劑調(diào)控TG的作用效果進(jìn)行評(píng)價(jià);雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法檢測(cè)Gen及P

4、PAR激動(dòng)劑處理四種油酸誘導(dǎo)的脂肪化細(xì)胞培養(yǎng)液中AMPK含量變化;熒光定量PCR法檢測(cè)Gen及PPAR激動(dòng)劑對(duì)四種脂肪化細(xì)胞中LPL及核受體PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)水平，同時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)四種細(xì)胞中PPARα、PPARγ蛋白含量進(jìn)行了測(cè)定。
　　結(jié)果:(1)確定四種細(xì)胞的脂肪化誘導(dǎo)最佳OA濃度1mM及誘導(dǎo)時(shí)間48h可以建立脂肪化細(xì)胞模型;(2)Gen能提高AMPK濃度，且為劑量依賴(lài)性。Gen作用效果表現(xiàn)為PPA

5、Rα、PPARγ激動(dòng)劑的作用方向一致;(3)Gen能提高細(xì)胞內(nèi)LPL及孤兒核受體PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)水平，增加細(xì)胞PPARα及PPARγ的蛋白含量。同樣Gen表現(xiàn)為PPARα、PPARγ激動(dòng)劑的作用效果一致。
　　結(jié)論:Gen對(duì)OA誘導(dǎo)的細(xì)胞脂肪化有一定的調(diào)節(jié)改善作用，這可能與Gen經(jīng)由PPARs上調(diào)代謝TG的主要相關(guān)酶AMPK及LPL等的表達(dá)，增加了AMPK及LPL的活性從而促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)行TG的代謝有關(guān);加入激動(dòng)劑