肉桂醛對(duì)食管癌細(xì)胞的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究中藥肉桂醛體外對(duì)食管癌細(xì)胞Eca109和KYSE30增殖、細(xì)胞周期和凋亡的影響，并探討其抗腫瘤機(jī)制，為其作為抗癌新藥開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1應(yīng)用MTS法檢測(cè)不同濃度肉桂醛對(duì)Eca109和KYSE30細(xì)胞增殖的影響。
　　2應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度肉桂醛對(duì)Eca109和KYSE30細(xì)胞周期分布和凋亡率的影響。
　　3應(yīng)用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度肉桂醛作用24h后Eca109

2、和KYSE30細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化。
　　4應(yīng)用iTRAQ質(zhì)譜分析肉桂醛處理組KYSE30細(xì)胞中蛋白表達(dá)譜的改變，并對(duì)差異蛋白進(jìn)行GO分析和KEGG分析。
　　結(jié)果：
　　1 MTS分析結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度（0、7.5、15、30μg/ml）肉桂醛干預(yù)12、24、48 h后，對(duì)Eca109和KYSE30細(xì)胞增殖抑制率呈上升趨勢(shì)（P<0.05），且具有時(shí)間和劑量依賴性。
　　2流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，經(jīng)不

3、同濃度肉桂醛干預(yù)24h后，Eca109和KYSE30細(xì)胞周期和凋亡率發(fā)生明顯變化， G0/G1期比例明顯下降（P<0.05），G2/M期細(xì)胞明顯增高（P<0.05），細(xì)胞凋亡率明顯增加（P<0.05）。
　　3 Western blot方法分析結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度肉桂醛干預(yù)后24h后，與對(duì)照組相比，Eca109和KYSE30細(xì)胞Bcl2和Mcl1蛋白表達(dá)水平降低，而促凋亡蛋白Bax表達(dá)水平明顯上調(diào)，均有顯著性差異（P<0.05）；

4、凋亡蛋白酶Caspase3和Caspase9出現(xiàn)明顯的裂解片段，且有顯著性差異（P<0.05）。
　　4 iTRAQ質(zhì)譜分析經(jīng)不同濃度肉桂醛干預(yù)24h后，與對(duì)照組相比， KYSE30細(xì)胞呈現(xiàn)210種差異蛋白，對(duì)所得210種差異蛋白進(jìn)行GO分析和KEGG Pathway分析，在UNIPROT數(shù)據(jù)庫(kù)中能夠注釋到的有205種蛋白，發(fā)現(xiàn)其中參加生物過(guò)程的蛋白共197個(gè)，其中主要參與正負(fù)調(diào)控細(xì)胞凋亡進(jìn)程的蛋白28個(gè)（13.7％）、參與細(xì)胞間

5、粘附的蛋白15個(gè)（7.3%）等；參與細(xì)胞組成的蛋白共204個(gè)，其中參與細(xì)胞質(zhì)組成的蛋白105個(gè)（51.2%）、細(xì)胞核組成成分的蛋白85個(gè)（41.5%）、核質(zhì)溶膠組成成分的蛋白74個(gè)（36.1%）等；參與細(xì)胞功能的蛋白共199個(gè)，主要參與蛋白質(zhì)結(jié)合140個(gè)（68.3%）、多聚RNA連接蛋白44個(gè)（21.5%）、ATP結(jié)合蛋白40個(gè)（19.5%）等。在KEGG Pathway分析中發(fā)現(xiàn)，募集到的101種差異蛋白可能參與了pathways i

6、n cancer（12種）、剪接體（9種）、MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路（9種）、凋亡通路（7種）和VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路（4種）等，其中參與蛋白種類最多的為pathways in cancer，但細(xì)胞凋亡通路分子為其中最有顯著性差異的蛋白（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1肉桂醛可抑制KYSE30和Eca109細(xì)胞增殖。
　　2肉桂醛能使KYSE30和Eca109細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　

7、　3肉桂醛可能通過(guò)下調(diào)Bcl2和Mcl1蛋白表達(dá)，上調(diào)促凋亡蛋白Bax，進(jìn)而促進(jìn)下游凋亡蛋白酶Caspase3和Caspase9活化，干擾細(xì)胞周期進(jìn)程，誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡。
　　4肉桂醛作用于食管癌KYSE30細(xì)胞與空白對(duì)照組進(jìn)行蛋白質(zhì)譜分析，將所得差異蛋白進(jìn)行KEGG分析，募集到差異蛋白可能參與了pathways in cancer、剪接體、MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、凋亡通路和VEGF和P53信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。其中參與蛋白種類最多的是