低滲透壓通過促進板狀偽足的形成加速細胞缺口的關閉.pdf

1、目的:通過PDMS微柱法建立細胞傷口愈合模型，通過對比等滲透壓，研究低滲透壓對細胞缺口愈合的影響，研究低滲透壓對細胞遷移速度、細胞肌動蛋白環(huán)及板狀偽足的影響，并對低滲透壓對細胞缺口關閉的作用機制進行初步探討。
　　方法:實驗細胞MDCK細胞（犬腎上皮細胞），隨機分為低滲組(n=5)和等滲組(n=6)作延時拍攝觀察細胞運動;用深反應離子刻蝕法制作好圓形微陣列凹槽的硅片板，深100μm，直徑180μm。往硅片板上灌注1∶10PDMS，

2、加熱后切下即可造好PDMS微柱模具。消毒PDMS微柱模具后，往模具下方種下MDCK細胞，待單層細胞長滿后，拔出柱子即在單層細胞中造出直徑180微米的缺口。活細胞工作站下(37℃，5％CO2)，顯微鏡下連續(xù)延時定點拍照，5分鐘拍一張，獲得圖片后分析低滲透壓(～150mOsm)和等滲透壓(～300mOsm)條件下細胞缺口關閉速度、偽足面積伸出的情況。此外，MDCK細胞低滲透壓和等滲透壓條件下分別處理15分鐘后，固定細胞，并做熒光染色，觀察不

3、同滲透壓下細胞肌動蛋白環(huán)的形成情況。
　　結果:細胞缺口關閉過程邊緣曲線周長變化圖中，可以看出低滲透下細胞缺口關閉比等滲壓下要快。計算速度后發(fā)現，低滲組細胞愈合速度3.93±1.04μm/min(n=5，mean±s.d.)，等滲組細胞愈合速度1.76±0.18μm/min(n=6，mean±s.d.)。細胞缺口關閉過程偽足伸出邊緣面積變化圖中，可以看出低滲透壓下板狀偽足要比等滲壓下的要明顯，低滲壓板狀偽足伸出面積1137.46±

4、70.26μm2(n=5，mean±s.d.)，等滲壓板狀偽足伸出面積60.44±21.87μm2(n=6，mean±s.d.)。等滲壓下可見肌動蛋白環(huán)的形成，而低滲透壓下幾乎觀察不到。熒光光密度分析曲線圖中，等滲壓下在缺口邊緣出現了熒光光密度的波峰，而低滲透壓下沒有出現。
　　結論:1、低滲壓環(huán)境下，MDCK細胞傷口愈合速度比等滲透壓下的更加快。低滲透壓下的板狀偽足比等滲透壓下的更明顯，而低滲透壓下沒有形成肌動蛋白環(huán)。