PKM2和USP18在食管鱗癌組織中的表達及臨床病理意義.pdf

1、背景與目的
　　食管癌在全球惡性腫瘤中排名第四位，病理類型以鱗狀細胞癌（ squamous cell carcinoma，SCC）最為多見。據(jù)大數(shù)據(jù)統(tǒng)計報道，食管癌的5年生存率在30％左右（15%～42%）。我國河南省林縣是食管癌的高發(fā)區(qū)，相對于其他惡性上皮源性的腫瘤，該區(qū)域的食管癌死亡率明顯高于全國平均水平。
　　就腫瘤的發(fā)病機制來講，腫瘤的異質(zhì)化是由多元素導(dǎo)致的，例如外界化學(xué)物質(zhì)刺激、基因突變、內(nèi)環(huán)境紊亂或者是機體自身正

2、常代謝停滯、異常代謝活躍等。某種因子在機體代謝活動中生成增多會影響正常的代謝過程，導(dǎo)致在細胞水平或者是基因水平上對整個機體的穩(wěn)態(tài)構(gòu)成威脅，進而出現(xiàn)腫瘤樣變。因此，確定腫瘤基因突變位點是研究腫瘤發(fā)展進程的關(guān)鍵。M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2，PKM2）作為糖酵解途徑中最重要的調(diào)節(jié)酶，能夠?qū)μ墙徒膺^程產(chǎn)生的大分子物質(zhì)的數(shù)量起到了關(guān)鍵性的掌控作用，同時為腫瘤細胞的生長代謝提供了所需的能量和原料，也對腫瘤細胞的生長周期起

3、到了調(diào)控作用。泛素特異性蛋白酶18（Ubiquitin specific protease18，USP18）作為一種干擾素誘導(dǎo)基因，在人體內(nèi)環(huán)境中主要扮演去泛素化的作用，受損組織被機體識別后會與ISG15（類泛素干擾素刺激基因）形成泛素化復(fù)合物，進而被吞噬細胞或水解酶降解清除。而USP18阻斷ISG15發(fā)揮泛素化作用，進而防止損傷的靶細胞被吞噬細胞降解或被水解酶水解，導(dǎo)致?lián)p傷細胞在體內(nèi)堆積不能及時清除，使腫瘤細胞處在營養(yǎng)豐富的環(huán)境內(nèi)，達

4、到促進腫瘤異質(zhì)化進程的效果，進而對腫瘤的生長代謝起到推動作用。
　　近年來尋找生物學(xué)標(biāo)記物成為了了解食管癌的腫瘤發(fā)病機制以及探索食管癌的早期篩查指標(biāo)和靶向治療位點的研究熱點，既能在探索食管癌發(fā)生發(fā)展的同時對食管癌做出早期診斷，又能進行靶向?qū)ΠY治療以提高生存率。明確腫瘤的突變點能夠從根本上遏制食管癌的發(fā)生，也能夠從分子角度扭轉(zhuǎn)腫瘤的單克隆現(xiàn)象，促進有腫瘤化趨勢的細胞發(fā)生凋亡，調(diào)節(jié)正常細胞進行常規(guī)的新陳代謝。進而，能夠響應(yīng)“早發(fā)現(xiàn)、早

5、診斷、早治療”的醫(yī)療目標(biāo)，對于提高食管癌患者的生存率、減少患者的致死率起到?jīng)Q定性的作用，也對食管癌的臨床治療效果和結(jié)局起到顯著改善和指導(dǎo)的效果。
　　本研究通過免疫組織化學(xué)法觀察PKM2和USP18在食管鱗狀細胞癌組織、正常食管黏膜組織以及食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織（低級別和高級別）中的表達情況，以及分析在不同分化程度、浸潤深度、年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況下的食管鱗癌組織中的差異性表達狀況，觀察其表達差異性是否與食管鱗狀上皮的異型增

6、生的進程以及各臨床指標(biāo)有關(guān)，對于探討PKM2和USP18在推進食管癌發(fā)生過程中的作用有很大的幫助作用。
　　方法
　　1.篩選60例于2015年01月～2015年12月間由鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科診斷為食管鱗狀細胞癌的病例，其中高分化、中分化、低分化鱗狀細胞癌組織各20例。病例標(biāo)本均為手術(shù)切除后的食管大標(biāo)本，經(jīng)常規(guī)病理取材，病理報告中有明確的腫物大小、位置、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及切緣是否取干凈等情況。另外選取6

7、0例正常食管黏膜組織，以及60例經(jīng)ESD或EMR切除后診斷為鱗狀上皮內(nèi)瘤變的組織，其中高級別、低級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織各30例。
　　2.實驗運用免疫組織化學(xué)技術(shù)對食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及正常食管黏膜組織進行USP18和PKM2的染色，嚴(yán)格按照SP免疫組化二步染色法的步驟進行。免疫標(biāo)記物 PKM2的陽性對照采用胃腺癌組織，免疫標(biāo)記物USP18的陽性對照采用肝癌組織，兩者陽性染色位于細胞核和細胞質(zhì)中，陰性對照均為不加

8、一抗染色的食管鱗癌組織。
　　3.統(tǒng)計學(xué)處理：運用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，對癌組織、食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織、正常食管黏膜組織以及不同臨床指標(biāo)下的食管癌組織進行獨立的兩組二分類和多組二分類比較，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果
　　1、PKM2在食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的陽性表達率分別為63.3%、30%、11.7%，且3組間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=36.19，P＜

9、0.05）?？梢姡琍KM2在食管鱗癌組織中的表達顯著高于其在食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及食管正常黏膜組織中的表達。另外在低級別和高級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織中PKM2的表達陽性率分別是16.7%和43.3%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.08，P＜0.05）。
　　2、USP18在食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的陽性表達率分別為65%、31.7%、3.3%，3組間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=51.45，P

10、＜0.05）?？梢?，USP18在食管鱗癌組織中的表達程度也是明顯高于其在食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的表達。USP18在低級別和高級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織中的陽性表達率分別為23.3%和40.0%，雖然陽性表達有逐漸增加的趨勢，但是與PKM2不同，USP18在低級別和高級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織中的陽性表達差異性很小，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.93， P>0.05）。
　　3、將診斷為食管鱗癌的病例根據(jù)不同的臨床指標(biāo)（