FOXM1通過調控ABCC10促進結直腸癌5-氟尿嘧啶耐藥的研究.pdf

1、背景:
　　結直腸癌是最常見的消化道腫瘤之一，其發(fā)病率和癌癥相關死亡率在各類腫瘤中居于前列。結直腸癌的治療手段包括手術、放療、化療，但其生存預后仍不樂觀。5-氟尿嘧啶作為臨床結直腸癌化療的一線用藥，其作用機制是通過抑制胸苷酸合酶的活性，影響DNA的合成。一部分患者由于原發(fā)性和繼發(fā)性對5-氟尿嘧啶治療形成耐藥，導致化療失敗，腫瘤復發(fā)轉移。FOXM1隸屬于叉頭框轉錄因子家族，在多種腫瘤化療藥物的耐受中發(fā)揮重要作用，但FOXM1對結直腸

2、癌與5-FU耐藥的作用和機制尚未明確。
　　方法:
　　1、基因芯片分析在5-FU治療敏感和不敏感的臨床標本中的差異基因。
　　2、分析FOXM1在結直腸癌細胞系中的表達含量和IC50之間的相關性。
　　3、選取細胞系中FOXM1表達含量高的兩株細胞和HCT-8/5-FU耐藥株，轉染慢病毒包裝的sh-FOXM1;FOXM1表達低的兩株細胞，轉染慢病毒包裝的FOXM1過表達質粒。驗證干擾和過表達效率，篩選穩(wěn)定轉染的

3、細胞，檢測5-FU的IC50值，平板克隆形成率，細胞凋亡水平。
　　4、選取FOXM1過表達的細胞系，裸鼠皮下種植，待腫瘤長到一定體積后予以裸鼠腹腔內注射5-FU和相關藥物，測量腫瘤體積大小，繪制腫瘤生長曲線，移植瘤做免疫組化檢測相關蛋白的表達水平。
　　5、利用生物信息學方法篩選參與5-FU代謝相關的并且啟動子區(qū)域具有FOXM1結合位點的基因，ChIP實驗驗證FOXM1對靶基因ABCC10的調控。
　　6、干擾下游靶

4、基因，檢測IC50值和凋亡相關變化，功能拯救實驗驗證FOXM1通過調控該靶基因參與5-FU的化療耐受。
　　7、臨床樣本。
　　結果:
　　經基因芯片篩選和驗證，FOXM1在5-FU不敏感的臨床樣本中表達含量高;結直腸癌細胞系中FOXM1的表達含量與5-FU的IC50值呈正相關;干擾FOXM1能增強結直腸癌細胞對5-FU的敏感性，抑制5-FU作用下克隆形成率，增加5-FU引起的細胞凋亡，反之過表達FOXM1能抑制結直腸

5、癌細胞對5-FU的敏感性;體內實驗進一步證實過表達FOXM1能增強結直腸癌移植瘤對5-FU的耐受性;機制研究表明FOXM1通過轉錄調控ABCC10的表達增強結直腸細胞對5-FU的耐受性，ABCC10抑制劑Vardenafil協(xié)同5-FU腹腔注射，能恢復5-FU耐藥移植瘤的化療反應性。
　　討論:
　　近年來研究發(fā)現FOXM1參與吉非替尼、順鉑、多西他賽、表柔霉素等多種化療藥物的耐受，本課題第一次提出FOXM1在5-FU的化療