天然香豆素及蒽醌類成分對褪黑素代謝的抑制作用及應(yīng)用計算機模型預(yù)測風(fēng)險.pdf

1、目的：評價66種常見中草藥對褪黑素代謝的抑制作用，明確中藥對人體內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響；系統(tǒng)研究中藥白芷及大黃對褪黑素代謝的抑制作用，明確其發(fā)揮作用的主要活性成分并進一步通過抑制動力學(xué)等手段明確其作用機制，進而預(yù)測臨床可能存在的藥物-藥物相互作用；最后在人的原代肝細胞中進行藥物藥物相互作用驗證；詳細測定47種香豆素類化合物對褪黑素的代謝抑制IC50值，同時構(gòu)建香豆素類成分結(jié)構(gòu)與其對褪黑素代謝抑制活性之間的定量構(gòu)效關(guān)系(3D-QSAR)，為

2、香豆素類藥物的臨床合理應(yīng)用提供寶貴的指導(dǎo)意見。
　　方法：（1）體外試驗：利用體外孵育體系，評價66種中藥提取物對褪黑素 CYP代謝的抑制作用；在活性指引條件下利用植物化學(xué)和相關(guān)手段明確中藥白芷及大黃中對褪黑素代謝抑制的主要活性成分并鑒定；并評價其在CYP和SULT單酶中的抑制活性。(2)系統(tǒng)分析白芷中主要香豆素類化合物及大黃蒽醌類成分對褪黑素代謝的抑制動力學(xué)，求算其抑制動力學(xué)參數(shù)，結(jié)合藥代動力學(xué)參數(shù)通過相關(guān)公式推測其可能存在的藥

3、物-藥物相互作用；同時在人的原代肝細胞中評價大黃蒽醌類成分和褪黑素藥物的相互作用。（3）精確測定47種香豆素類成分對褪黑素代謝的抑制 IC50值，利用精確 IC50和化合物的結(jié)構(gòu)通過比較分子場分析法和比較分子相似性分析方法構(gòu)建模型，確定其結(jié)構(gòu)與活性的定量構(gòu)效關(guān)系（3D-QSAR）；并利用分子對接研究大黃蒽醌類成分與CYP1A2和SULT1A1酶的立體空間結(jié)合位點進一步解釋其抑制機理。
　　結(jié)果：在本實驗工作中，首次篩選了66種常見

4、中草藥對褪黑素體外代謝的抑制作用，發(fā)現(xiàn)其中白芷和大黃表現(xiàn)出了最強烈的抑制作用。通過活性指引的植物化學(xué)分離方法確定了白芷、蛇床子、補骨脂等中藥主要發(fā)揮抑制作用的為香豆素成分，主要包括歐前胡素，異歐前胡素，珊瑚菜素，5-甲氧補骨脂素和8-甲氧補骨脂素，抑制動力學(xué)分析表明它們對褪黑素CYP代謝抑制形式為混合抑制動力學(xué)，其抑制Ki值分別為14.5 nM，38.8 nM，6.34 nM，5.34 nM和18 nM。同樣方法確定了大黃中的大黃蒽醌類

5、成分，包括蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素和大黃素甲醚為大黃抑制活性的關(guān)鍵作用物質(zhì)，抑制形式為混合抑制動力學(xué)，它們對褪黑素CYP代謝的抑制Ki值分別為0.16μM，0.14μM，0.42μM，0.24μM，和1.0μM。另外，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素對褪黑素二相磺酸化代謝也表現(xiàn)出了較好的混合性抑制作用，其Ki值分別為0.20μM，1.6μM和0.12μM。最后選取了大黃蒽醌類成分進行體外抑制作用的研究，我們在人的原代肝細胞中進行 D

6、DI的研究，結(jié)果表明大黃粗提物能夠抑制褪黑素的代謝清除過程，表現(xiàn)出較強的藥藥相互作用。為了更進一步的研究香豆素類成分結(jié)構(gòu)與褪黑素代謝抑制活性之間的定量構(gòu)效關(guān)系，我們精確測定了47種香豆素類化合物對褪黑素CYP代謝的抑制IC50值，并建立了CoMFA和CoMSIA預(yù)測模型。
　　結(jié)論:1)體外中藥篩選結(jié)果提示富含香豆素和蒽醌類化合物的中藥均有可能對褪黑素的代謝清除起到一定的抑制作用；2)香豆素類化合物和大黃蒽醌類化合物主要通過與關(guān)鍵