超聲聯(lián)合微泡增強(qiáng)宮頸癌對(duì)化療藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)及臨床研究.pdf

1、宮頸癌（cervical carcinoma, CC）是女性常見(jiàn)惡性腫瘤，其發(fā)病率高，全球年新增發(fā)病例數(shù)460,000，其中發(fā)展中國(guó)家占80％以上。宮頸腫瘤多發(fā)生于40-70歲的中老年圍絕經(jīng)期婦女，但近年來(lái)，宮頸癌發(fā)病日趨年輕化，20-30歲育齡期婦女也較常見(jiàn)；其組織病理類型中宮頸鱗狀細(xì)胞癌占80%以上，宮頸腺癌及腺鱗癌發(fā)病率也逐漸增高。宮頸癌患者多表現(xiàn)為陰道不規(guī)則出血、同房后出血，也有少數(shù)患者無(wú)明顯癥狀，在健康體檢中發(fā)現(xiàn)。宮頸腫瘤多由

2、HPV病毒感染引起，根據(jù)腫瘤分期，治療方法采取手術(shù)、放療及化療的綜合治療，早期發(fā)現(xiàn)并合理施治能提高患者生存率，改善預(yù)后；隨著生活水平的提高及宮頸腫瘤發(fā)病的年輕化趨勢(shì)，更多患者渴求保留子宮甚至保留生育功能；因此宮頸癌的診療不僅要求規(guī)范化，更需要個(gè)體化。
　　大量臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，中晚期宮頸癌患者在實(shí)施新輔助化療后，腫瘤緩解率增高，新輔助化療后手術(shù)切除率明顯增高，達(dá)48-100%，患者5年生存率約為83%，但腫瘤耐藥及化療藥物的毒副作用使

3、術(shù)前化療的臨床應(yīng)用受到限制。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，不同強(qiáng)度、不同頻率的超聲波聯(lián)合微泡介導(dǎo)的超聲空化效應(yīng)能對(duì)腫瘤內(nèi)部微小血管產(chǎn)生不同程度的影響，高聲壓超聲波多數(shù)造成血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，微血栓形成，血管壁通透性增高，低聲壓超聲波可使腫瘤血管擴(kuò)張，血流速度增快，腫瘤血流灌注增加。為進(jìn)一步深入研究超聲聯(lián)合微泡對(duì)腫瘤化療的增敏作用及其機(jī)制，我們運(yùn)用低頻率低聲壓超聲聯(lián)合微泡輔助順鉑作用于宮頸癌HeLa細(xì)胞，通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖活性及凋亡水平的影響，推

4、測(cè)超聲聯(lián)合微泡在一定程度上能增強(qiáng)化療藥物的作用，造成細(xì)胞增殖減緩，促使細(xì)胞凋亡增加；為進(jìn)一步證實(shí)超聲增敏臨床術(shù)前化療的作用，我們對(duì)10例行新輔助化療的宮頸癌患者給予診斷超聲聯(lián)合微泡及雙氧水的增敏治療，同時(shí)選取29例IIA-IIB期行新輔助化療的宮頸癌患者作為對(duì)照組，比較兩組患者新輔助化療前后宮頸及宮頸腫塊的大小改變，對(duì)10例行超聲治療的宮頸癌患者進(jìn)行治療前后超聲造影，觀察超聲治療前后宮頸腫塊的血流灌注改變情況，經(jīng)化療后的患者部分進(jìn)行子宮

5、完全切除手術(shù)，對(duì)宮頸癌肌層浸潤(rùn)深度進(jìn)行病理學(xué)評(píng)價(jià)，宮頸肌層無(wú)癌細(xì)胞浸潤(rùn)=0分，腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)肌層＜1/2=1分，腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)肌層＞1/2=2分，浸潤(rùn)肌層全層=3分，比較試驗(yàn)組與對(duì)照組病理評(píng)分，研究結(jié)果初步顯示超聲聯(lián)合微泡及雙氧水能明顯改變宮頸腫瘤的血流灌注狀態(tài)，有使宮頸腫瘤術(shù)后病理完全緩解率增加的趨勢(shì)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　第一部分：首先測(cè)定順鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的毒性作用，在一定濃度順鉑作用下，對(duì)空白對(duì)照組(C)，單純順鉑

6、組(P)，超聲微泡組(UM)，順鉑超聲組（PU），超聲微泡順鉑組(PUM)的Hela細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)處理后，使用CCK-8對(duì)細(xì)胞增殖活性進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)行 Annexin-FITC/PI雙染色，運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況，通過(guò)Hochest33342染色，在熒光顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)各組細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。
　　第二部分：選取10例IIa-IIb經(jīng)病理學(xué)確診的宮頸癌患者，同時(shí)選取近期在本院進(jìn)行治療的29例同期別宮頸癌患者作為對(duì)照組，

7、患者的治療方案均為紫杉醇聯(lián)合奈達(dá)鉑的宮頸癌新輔助化療后實(shí)施子宮全切術(shù)，對(duì)試驗(yàn)組的10例患者在化療過(guò)程中進(jìn)行超聲聯(lián)合微泡及雙氧水的增敏治療，選取兩種不同的超聲輻照模式， B-MODE輻照模式和Flash輻照模式進(jìn)行治療，根據(jù)化療周期，每位患者進(jìn)行2-4次增敏治療，并在超聲治療前后行宮頸腫瘤超聲造影，并通過(guò)TIC曲線定量分析宮頸腫瘤的多組超聲造影參數(shù)（PI,AUC,TP,MTT），比較兩組患者新輔助化療前后宮頸及宮頸腫瘤的大小改變，通過(guò)造影

8、參數(shù)評(píng)估超聲增敏治療前后宮頸血流灌注的改變情況，化療后部分患者行子宮全切除術(shù)，通過(guò)術(shù)后病理標(biāo)本對(duì)試驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行定性定量評(píng)價(jià)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1．超聲聯(lián)合微泡能使腫瘤細(xì)胞增殖速率減慢，凋亡增加
　?。?）通過(guò)終濃度抑制率回歸曲線圖計(jì)算得出順鉑的IC50為4.822μg/ml。（2）空白對(duì)照組（C）和超聲微泡組（UM）的細(xì)胞在24h、48h、72h、96h生長(zhǎng)趨勢(shì)無(wú)明顯差異，超聲+微泡+順鉑組（PUM）的生長(zhǎng)明顯

9、受到抑制，增殖速度減慢。
　?。?）超聲+微泡+順鉑組（PUM）在處理后24h的凋亡率為58.1%，單純順鉑組（P）和順鉑+超聲組（PU）凋亡率分別為25.3%和41.5%，空白對(duì)照組(C)和超聲+微泡組（UM）凋亡不明顯；
　?。?）Hoechst33342染色后通過(guò)熒光顯微鏡觀察，PUM組細(xì)胞約50%呈胞核致密濃染的固縮狀態(tài)，胞核藍(lán)染高亮，形成凋亡小體。
　　2．超聲聯(lián)合微泡及雙氧水增敏宮頸癌化療
　?。?）

10、宮頸腫瘤在新輔助化療后，試驗(yàn)組和對(duì)照組宮頸腫塊均明顯縮小，試驗(yàn)組宮頸腫塊最大徑線由40.90mm縮小至11.43mm，但兩組間比較無(wú)明顯差異；
　　（2）超聲造影參數(shù)分析，B-MODE治療模式下，超聲治療后宮頸腫瘤造影顯示峰值強(qiáng)度（PI），曲線下面積（AUC）均增高；Flash治療模式下，超聲治療后宮頸腫瘤造影顯示：達(dá)峰時(shí)間（TP），平均渡越時(shí)間（MTT）均明顯延長(zhǎng)。
　?。?）通過(guò)分析超聲造影圖像，使用B-MODE超聲治療

11、模式下，可見(jiàn)宮頸腫瘤血流灌注明顯增加，血流灌注強(qiáng)度增強(qiáng)；在 Flash超聲治療模式下，部分宮頸腫瘤出現(xiàn)治療后出現(xiàn)血流灌注減慢，峰值強(qiáng)度減低，平均渡越時(shí)間及達(dá)峰時(shí)間延長(zhǎng)，也可見(jiàn)部分患者出現(xiàn)血流灌注增加。
　　（4）病理結(jié)果，試驗(yàn)組（n=10）：0分3例（30%）、1分4例(40%)、2分3例(30%)、3分0例；對(duì)照組（n=29）有0分3例（10.3%）、1分7例(24%)、2分15例(51%)、3分4例（13.7%）。采用fish

12、er確切概率法對(duì)病理結(jié)果是否完全緩解進(jìn)行分析，得出P=0.06,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但試驗(yàn)組患者中的病理完全緩解率有增加趨勢(shì)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　1．低聲壓低頻率超聲聯(lián)合微泡能夠增強(qiáng)宮頸癌Hela細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，一定程度上抑制腫瘤細(xì)胞的增殖活性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡增加，有降低并延緩腫瘤細(xì)胞耐藥性產(chǎn)生的趨勢(shì)。
　　2．診斷超聲聯(lián)合微泡及雙氧水可以明顯改變宮頸腫瘤病灶血流灌注強(qiáng)度，血流灌注時(shí)間，即超聲空化造成的血管效應(yīng)。該效