rh-HGF聯(lián)合rh-VEGF165促內皮細胞增殖及治療實驗性大鼠下肢缺血的實驗研究.pdf

1、目的：
　　構建實驗性大鼠下肢缺血模型及培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞（HUVECs），使用重組人血管內皮細胞生長因子165（ rh-VEGF165）和重組肝細胞生長因子（rh-HGF）刺激，觀察刺激后體外HUVECs的增殖及體外管腔形成情況，體內下肢毛細血管新生情況。
　　方法：
　　1.研究rh-VEGF165和rh-HGF刺激HUVECs的增殖情況：采用不同濃度的rh-VEGF165和rh-HGF（0 ng/ml、5 ng

2、/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、50 ng/ml、75ng/ml、100ng/ml、120ng/ml）培養(yǎng)HUVECs細胞，CCK-8（水溶性四唑鹽比色法）檢測HUVECs增殖情況。
　　2.研究rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF刺激HUVECs的增殖情況：采用聯(lián)合不同濃度的rh-VEGF165和rh-HGF（0ng/ml+0ng/ml、5ng/ml+5ng/ml、10ng/ml+10ng/ml、30ng/ml+30

3、ng/ml、50ng/ml+50ng/ml、75ng/ml+75ng/ml、100ng/ml+100ng/ml、120ng/ml+120ng/ml）培養(yǎng)HUVECs細胞，CCK-8檢測HUVECs增殖情況。
　　3.研究rh-VEGF165和rh-HGF刺激HUVECs的體外管腔形成情況：分別以對照組0.9％的生理鹽水、100ng/ml rh-VEGF165、100ng/ml rh-HGF和100ng/ml rh-VEGF165聯(lián)

4、合100ng/ml rh-HGF培養(yǎng)HUVECs細胞，相差顯微鏡觀察體外管腔形成情況。
　　4.研究rh-VEGF165和rh-HGF在體內的作用情況：建立實驗性大鼠下肢缺血模型，以對照組0.9%的生理鹽水、100ng/ml rh-VEGF165、100ng/ml rh-HGF和100ng/ml rh-VEGF165聯(lián)合100ng/ml rh-HGF作用于實驗性大鼠，28天后取缺血下肢腓腸肌標本，做H-E染色觀察肌組織核情況，免疫

5、組化觀察毛細血管新生情況。
　　結果：
　　1.rh-VEGF165刺激HUVECs的增殖情況：隨著rh-VEGF165的濃度升高， HUVECs的細胞光密度值（OD值）也隨之升高，與對照組相比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），rh-VEGF165的濃度為10ng/ml時，OD值可達到最高，繼續(xù)增加rh-VEGF165的濃度，OD值無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.rh-HGF刺激HUVECs的增殖情況：隨著

6、rh-HGF的濃度升高，HUVECs的OD值也隨之升高，與對照組相比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），rh-HGF的濃度為100ng/ml時，OD值可達到最高，繼續(xù)增加rh-HGF的濃度，OD值無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　3.rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF刺激HUVECs的增殖情況：隨著不同聯(lián)合濃度改變，HUVECs的OD也隨之升高，與對照組相比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）， rh-VEGF165聯(lián)合rh

7、-HGF的濃度為100ng/ml+100ng/ml時，OD值可達到最高，繼續(xù)增加rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF的濃度，OD值無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　4.rh-VEGF165的濃度為100ng/ml、rh-HGF的濃度為100ng/ml、rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF的濃度為100ng/ml+100ng/ml， rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF的OD值>rh-HGF的OD值>rh-VEGF165的OD值，

8、三者之間的OD值有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　5.體外管腔實驗結果：對照組無明顯毛細管腔樣結構，實驗組均可見明顯毛細管腔樣結構，rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF組最明顯。
　　6.H-E染色結果提示：體內實驗中，對照組與rh-HGF組間差異無明顯統(tǒng)計學意義（P＞0.05），rh-VEGF165組、rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF組與對照組間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），rh-VEGF165組、rh-VEG

9、F165聯(lián)合rh-HGF組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　7.免疫組化結果提示：體內實驗中，對照組與rh-HGF組間差異無明顯統(tǒng)計學意義（P＞0.05），rh-VEGF165組、rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF組與對照組間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），rh-VEGF165組、rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論：
　　rh-VEGF165聯(lián)合 rh-H