人胚胎干細胞hESCs對HepG2-A549兩種腫瘤細胞的作用研究.pdf

1、目的：建立hESCs-HepG2、hESCs-A549非接觸式共培養(yǎng)體系，探究人胚胎干細胞hESCs體外對人肝癌細胞系HepG2和人肺癌細胞系A549在侵襲遷移、增殖、凋亡等生物學行為方面的影響，為腫瘤的干細胞治療奠定理論基礎。
　　方法：利用Transwell小室將hESCs與HepG2、A549進行共培養(yǎng)，建立hESCs-HepG2、hESCs-A549非接觸式共培養(yǎng)體系，為腫瘤細胞提供hESCs微環(huán)境。將與hESCs共培養(yǎng)的

2、HepG2、A549作為Co-HepG2、Co-A549實驗組；單獨培養(yǎng)在小室內的腫瘤細胞作為HepG2、A549對照組。與hESCs共培養(yǎng)后，Transwel法檢測HepG2、A549的侵襲、遷移能力；MTT法檢測各組細胞的增殖情況，F(xiàn)low Cytometry檢測hESCs對HepG2、A549細胞周期的影響，Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術檢測各組細胞的凋亡情況。qRT-PCR、Western

3、Blot檢測各組細胞Cyclind1、CDK4、P21、Bax、Bcl2的mRNA轉錄水平及蛋白表達情況。
　　結果：實驗結果顯示，與hESCs共培養(yǎng)后，HepG2的侵襲能力顯著降低；A549的侵襲能力與對照組比明顯降低(P＜0.05)；在遷移實驗中，Co-HepG2組中穿過Transwell底膜的細胞數(shù)量與HepG2對照組比顯著減少(P＜0.05)；Co-A549組通過小室底膜的細胞數(shù)量與A549對照組比顯著減少(P＜0.05)

4、。與hESCs共培養(yǎng)后，Co-HepG2、Co-A549實驗組細胞的增殖能力受到顯著抑制，且隨著時間增加，該抑制作用越明顯(P＜0.05)；Flow Cytometry檢測發(fā)現(xiàn)Co-HepG2組處于G1期的細胞與HepG2對照組比明顯增多(P＜0.05)，Co-A549實驗組中G1期細胞與A549對照組比組顯著增加；通過qRT-PCR檢測細胞周期相關基因的表達量發(fā)現(xiàn)：與對照組比，Co-HepG2細胞內CDK4、CyclinD1 mRNA

5、相對表達量顯著降低，P21表達著增加(P＜0.05)；Co-A549中CDK4、CyclinD1 mRNA相對表達量與A549對照組比顯著降低，P21表達顯著增加(P＜0.05)；Western Blot實驗結果進一步顯示CDK4、CyclinD1、P21蛋白表達趨勢與qRT-PCR結果相符，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Hoechst凋亡染色實驗結果顯示Co-HepG2、Co-A549實驗組中固縮、變形、出現(xiàn)濃染的細胞核數(shù)量較H

6、epG2、A549對照組多；進一步檢測發(fā)現(xiàn)Co-HepG2細胞凋亡率為16.77%，與HepG2對照組2.93%比顯著增加(P＜0.05)，Co-A549組中細胞凋亡率12.73%與A549對照組1.9%比顯著增加(P＜0.05)；通過qRT-PCR實驗發(fā)現(xiàn)：在Co-HepG2中凋亡相關基因Bcl2相對表達與HepG2對照組比顯著降低，Bax表達顯著增加(P＜0.05)；與A549對照組比，Co-A549中Bcl2 mRNA相對表達量顯