5-氮雜胞苷抑制血管緊張素Ⅱ誘導的心肌細胞肥大的作用研究.pdf

1、【研究背景】：
　　據(jù)中國心血管病報告2011公布的資料顯示，心血管疾病死亡率逐年上升，農村居民心血管病死亡率增加速度高于城市居民；中國人口的總死亡率中心血管病死亡占總死亡原因的41％，居各種死因的首位，全國每年350萬人死于心血管病，我國10省市20個城鄉(xiāng)調查發(fā)現(xiàn)，35～74歲人群的慢性心衰發(fā)生率為0.9%，且發(fā)病年齡趨于年輕化，對社會經濟建設造成巨大影響。高血壓、冠心病、動脈粥樣硬化、心臟瓣膜疾病等眾多心血管疾病的代償性病理生

2、理表現(xiàn)。而鈣水平紊亂在心肌肥大的發(fā)生機制中起極為重要的作用。本研究是基于我們相關前期研究，前期研究結果表明，心肌細胞內鈣調控相關基因的異常表達可導致細胞內鈣穩(wěn)態(tài)失衡，繼而激活鈣敏感鈣調素依賴鈣調神經磷酸酶(CaN)和鈣調素依賴蛋白激酶(CaMKs)途徑，導致心肌細胞肥大的發(fā)生。
　　心肌細胞肥大時鈣調控和鈣信號途徑相關基因的調控機制目前尚未完全明了，而相關基因啟動子區(qū)甲基化水平變化可調節(jié)基因的異常表達，導致了疾病發(fā)生。在前期工作基

3、礎上，本研究擬分析甲基化酶抑制劑5-氮雜胞苷在體外誘導的心肌細胞肥大中，對細胞鈣調控相關基因SERCA2a、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ表達水平和相關基因表達的異常改變以及細胞內鈣水平的變化，并進一步分析鈣信號途徑相關基因變化與心肌細胞肥大的相互關系，以期探索鈣調控和鈣信號途徑相關基因表達水平改變、調控機理及其在心肌細胞肥大發(fā)生的作用。該研究將為進一步探討心肌細胞肥大的發(fā)生機制以及臨床治療奠定基礎，具有較大的社會和經濟效益。
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4、研究目的】：
　　探討甲基化酶抑制劑5-氮雜胞苷（5-AZA-2’-dC）抑制血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）誘導的心肌細胞肥大的作用。
　　【研究方法】：
　　1、原代乳鼠心肌細胞分離、純化、培養(yǎng)，免疫熒光進行原代鑒定。
　　2、建立心肌細胞肥大模型、干預藥物濃度選擇及實驗分組：采用不同濃度血管緊張素Ⅱ誘導心肌細胞肥大；不同濃度5-氮雜胞苷處理，cck8檢測細胞存活率。根據(jù)處理方法，分為5組，分別為對照組、血管緊張素Ⅱ

5、組、5-氮雜胞苷組、血管緊張素Ⅱ與5-氮雜胞苷同時處理組和5-氮雜胞苷預處理組。
　　3、測定心肌細胞ANP mRNA及蛋白表達、細胞面積等心肌細胞肥大的指標；
　　4、采用Western blot法檢測各組心肌細胞ANP、SERCA2a、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ的蛋白質表達的水平；
　　5、鈣離子探針孵育細胞，激光共聚焦檢測胞內鈣變化情況。
　　【研究結果】：
　　1、血管緊張素Ⅱ體外誘導原代乳鼠心肌細

6、胞肥大呈濃度依賴性；5-氮雜胞苷對心肌細胞毒性呈濃度依賴性。
　　2、血管緊張素Ⅱ(10-6 mol/L)處理心肌細胞48 h，可使心房利鈉肽（ANP）增加，而該作用可被5-氮雜胞苷（10-6 mol/L）抑制。與對照組相比，血管緊張素Ⅱ組心肌的ANP、p-CaMKⅡ蛋白表達明顯增加；而5-氮雜胞苷同時加藥組及預處理組較之血管緊張素Ⅱ組則下降。
　　3、與對照組相比，血管緊張素Ⅱ組心肌的SERCA2a蛋白質表達下降，5-氮雜