羥基喜樹堿膠束的制備及其抗腫瘤作用的初步研究.pdf

1、本文對羥基喜樹堿膠束的制備及其抗腫瘤作用進行了研究。本研究分為三個部分;
　　第一部分：HCPT含量測定方法學(xué)的建立。
　　目的：建立羥基喜樹堿（HCPT）體外含量測定的方法與標(biāo)準(zhǔn)。
　　方法：配制HCPT標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用紫外分光光度計于200～400nm處進行光譜掃描，確定吸收波長；同時配制一定濃度的聚乙二醇接枝聚天冬氨酸（PEG-g-PASP）載體及聚乙二醇接枝聚天冬氨酸（羥基喜樹堿）(PEG-g-PASP(HCPT

2、))納米膠束的甲醇溶液，用同樣方法進行光譜掃描。配制一系列濃度的HCPT甲醇溶液，在確定波長處分別測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進行日內(nèi)、日間精密度及回收率考察。
　　結(jié)果：經(jīng)紫外掃描確定HCPT吸收波長為384nm，且載體在此波長處無吸收，對PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束中HCPT的測定無干擾。HCPT藥物濃度在（2.0～7.0）ug/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，計算回歸方程為:A=0.0922C+0.0046(R2=0.9

3、995)，日內(nèi)、日間精密度RSD均小于5％，平均回收率為99.7%。
　　結(jié)論：紫外分光光度法測定PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束包封率及載藥量符合方法學(xué)要求，實驗操作簡便、可行。
　　第二部分：PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束的制備及表征。
　　目的：制備PEG-g-PASP納米載藥膠束，并包載難溶性抗癌藥物HCPT，從而實現(xiàn)抗癌藥物的緩控釋放及腫瘤靶向性，同時增加藥物溶解性，延長半衰期。
　　

4、方法：采用自制甲氧基單末端氨基聚乙二醇（PEG-NH2）與PSI反應(yīng)，堿性條件下水解得到PEG-g-PASP納米載藥膠束，最后采用透析法制備PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束。通過紫外分光光度計測定膠束的包封率及載藥量，并以此為評價指標(biāo)選擇最優(yōu)處方。采用激光粒度分析儀測定最優(yōu)處方下PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束的粒徑及其分布，透射電鏡下觀察膠束的形貌及粒徑，同時采用芘熒光探針法測定該膠束的臨界膠束濃度。
　　結(jié)果：

5、成功制備PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束，其包封率及載藥量隨藥物的增加先增加后減小，藥物與聚合物的最佳質(zhì)量比為1.5:15，按照最優(yōu)處方制得的PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束成形良好，呈圓球型，結(jié)構(gòu)規(guī)整，大小均勻，無粘連，平均粒徑為55.26nm，包封率為18.92%，載藥量為1.89%，臨界膠束濃度為6.76×10-3 mg/ml。
　　結(jié)論：以自制PEG-g-PASP為載體材料,HCPT為模型藥物,通過透析法制

6、備了PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束,并對其投料比進行考察，選出了最優(yōu)處方。激光粒度儀和透射電鏡測得的最優(yōu)處方下的膠束粒徑及形貌均較為理想，熒光分光光度計測得的臨界膠束濃度較小，具有較好的熱力學(xué)穩(wěn)定性。
　　第三部分：PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束對RSCC-1細胞體外抑制實驗。
　　目的：探討PEG-g-PASP(HCPT)納米膠束對RSCC-1細胞體外抑制作用。
　　方法：復(fù)蘇凍存的兔舌癌RSCC

7、-1細胞，培養(yǎng)并傳代至對數(shù)生長期。取對數(shù)生長期的兔舌癌RSCC-1細胞與PBS、不同濃度的PEG-g-PASP空白膠束、HCPT和PEG-g-PASP(HCPT)共同培養(yǎng)不同時間后， MTT法檢測體外細胞毒作用，計算細胞生長抑制率。
　　結(jié)果：MTT檢測結(jié)果顯示HCPT具有明顯細胞毒作用，作用強度與藥物濃度及作用時間成正相關(guān)；PEG-g-PASP空白膠束對RSCC-1細胞無細胞毒作用(P＞0.05)；PEG-g-PASP(HCPT