凝集素化量子點(diǎn)的制備表征及其在肝癌診斷中的應(yīng)用.pdf

1、目的：制備并表征光學(xué)性能優(yōu)良的凝集素化量子點(diǎn)熒光探針并研究其在肝癌診斷中的應(yīng)用。
　　方法：
　　1.量子點(diǎn)的合成與表征：水相兩步合成一系列粒徑不同的水溶性量子點(diǎn)，采用紫外、熒光光譜表征量子點(diǎn)的光學(xué)特性并從制備的水溶性量子點(diǎn)中選取光學(xué)性能良好的呈現(xiàn)綠色和紅色的量子點(diǎn)（QD550和QD618）做后續(xù)研究；同時(shí)采用MTT法評(píng)價(jià)量子點(diǎn)的細(xì)胞毒性和篩選后續(xù)實(shí)驗(yàn)安全的量子點(diǎn)濃度。
　　2.凝集素化量子點(diǎn)的制備表征：利用量子點(diǎn)表面

2、的羧基和凝集素上的氨基通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)的方式制備凝集素化量子點(diǎn)熒光探針；采用瓊脂糖凝膠電泳表征曼陀羅凝集素（DSA）和扁豆凝集素（LCA）兩種凝集素是否分別與量子點(diǎn)QD550和QD618偶聯(lián)成功；利用紫外和熒光光譜考察凝集素化量子點(diǎn)熒光探針的光學(xué)性質(zhì)；采用兔血紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)、糖-凝集素抑制實(shí)驗(yàn)考察DSA和LCA與QD550和QD618偶聯(lián)前、后的生物活性；采用MTT法評(píng)價(jià)凝集素化量子點(diǎn)對(duì)HepG2和LO2細(xì)胞的毒性。
　　3.兩種凝集

3、素化量子點(diǎn)熒光探針特異性靶向標(biāo)記HepG2細(xì)胞表面糖類復(fù)合物的研究：選取人肝癌細(xì)胞HepG2為細(xì)胞模型，熒光顯微鏡下成像，直觀定性表征兩種凝集素化量子點(diǎn)對(duì)HepG2細(xì)胞的標(biāo)記情況；同時(shí)結(jié)合對(duì)照實(shí)驗(yàn)和凝集素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)考察兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針特異性靶向標(biāo)記HepG2細(xì)胞表面不同糖類復(fù)合物表達(dá)情況。選取HepG2細(xì)胞和正常肝細(xì)胞LO2細(xì)胞為細(xì)胞模型，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)定量分析上述兩種細(xì)胞表面表達(dá)的糖復(fù)合物，并比較HepG2細(xì)胞和LO2細(xì)胞

4、表面表達(dá)的糖復(fù)合物的差異，從而評(píng)價(jià)兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針對(duì)肝癌細(xì)胞的診斷效力。
　　結(jié)果：優(yōu)化的量子點(diǎn)的合成條件是：反應(yīng)原料的最佳比例是Cd2+:Te:NaBH4=1:0.5:10，最適溫度為98℃，pH值為10.5。在優(yōu)化的反應(yīng)條件下合成了量子產(chǎn)率是28.9％，粒徑分布均勻，直徑約2～3nm，熒光穩(wěn)定性較好的水溶性量子點(diǎn)；將綠色量子點(diǎn)（QD550）和紅色量子點(diǎn)（QD618）分別與DSA和LCA共價(jià)結(jié)合成功制得兩種凝集素化量子

5、點(diǎn)熒光探針QD550-DSA和QD618-LCA；經(jīng)紫外和熒光光譜結(jié)果表明量子點(diǎn)和凝集素共價(jià)結(jié)合后，凝集素化量子點(diǎn)基本保持了原有量子點(diǎn)的光學(xué)性質(zhì)；兔血紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)證實(shí)，凝集素的生物活性也沒(méi)有受到影響，且MTT結(jié)果表明QD550-DSA和QD618-LCA對(duì)正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的毒性均較低；熒光顯微鏡結(jié)果顯示：凝集素化量子點(diǎn)熒光探針能直觀熒光標(biāo)記HepG2細(xì)胞上特異性表達(dá)的糖類復(fù)合物；流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果表明，凝集素化量子點(diǎn)熒光探針與He

6、pG2細(xì)胞表面的結(jié)合較裸量子點(diǎn)顯著性增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01），且當(dāng)HepG2細(xì)胞被加入的凝集素預(yù)飽和后，探針與HepG2細(xì)胞表面的結(jié)合較沒(méi)有被凝集素飽和的高，有顯著性差異（p＜0.05），說(shuō)明兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針與肝癌細(xì)胞的結(jié)合是具有特異性的，且HepG2細(xì)胞表面的N-乙酰葡糖胺的含量是LO2細(xì)胞的1.64倍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），甘露糖的含量是LO2 細(xì)胞的1.82倍，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01），