cAMP-PKa-CREB信號轉導通路在錳致PC12細胞中的毒性作用及其機制研究.pdf

1、目的:
　　通過體外PC12細胞染錳實驗，測定對照組、不同濃度錳處理組及抑制劑作用組cAMP-PKA-CREB信號轉導通路相關蛋白及其下游凋亡蛋白的表達情況，探討cAMP-PKA-CREB信號通路在錳致神經毒性作用的潛在機制。
　　方法:
　　將體外培養(yǎng)的PC12細胞通過不同濃度的MnCl2·4H2O溶液(0、100、200、300、400、500、600、700、800、900μ M)處理24小時后，在倒置相差顯微鏡

2、下觀察細胞形態(tài)，經MTT法測定其存活率，確定PC12細胞染錳濃度為:對照組(0μM)，低劑量錳處理組(400μ M)，中劑量錳處理組(500μM)和高劑量錳處理組(600μ M);此外設置一組抑制劑作用組:PC12細胞用濃度為10.0μ M的咯利普蘭(Rolipram)預先處理1小時，隨后給予500μ M的MnCl2·4H20處理24小時，收集對照組、各個錳處理組及抑制劑組的PC12細胞，然后采用AnnexinⅤ-FITC細胞凋亡試劑盒

3、檢測其凋亡率，采用ELISA試劑盒檢測細胞內cAMP-PKA-CREB信號通路相關蛋白cAMP、pCREB和BDNF蛋白表達水平，western blot測定細胞內cAMP-PKA-CREB信號通路相關蛋白PDE4和PKA的蛋白含量以及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表達水平。
　　結果:
　　1.當染錳濃度等于或高于300μM時，隨著染錳濃度的升高，PC12細胞存活率顯著下降（P＜0.05)。與對照組相比，低劑量、中劑量以及高

4、劑量錳處理組PC12細胞存活率顯著降低（P＜0.05)。不同濃度的錳可以引起PC12細胞不同程度的損傷以及形態(tài)學的變化。
　　2.隨著染錳濃度的增高，cAMP-PKA-CREB信號轉導通路相關蛋白表達水平顯著改變。其中:cAMP、PKA、pCREB和BDNF蛋白含量隨著染錳濃度的升高顯著降低（P＜0.05);與之相反，PDE4蛋白表達水平隨著染錳濃度的升高顯著增加（P＜0.05)。
　　3.隨著染錳濃度的升高，凋亡相關蛋白表

5、達水平顯著改變。其中:促凋亡蛋白Bax含量隨著錳處理濃度的升高而顯著增加（P＜0.05）;抗凋亡蛋白Bcl-2含量隨著染錳濃度的增加而顯著降低(P＜0.05)。
　　4.抑制劑Rolipram預先處理細胞一小時后，可以顯著改變cAMP-PKA-CREB信號轉導通路相關蛋白及其下游凋亡蛋白的表達水平。在cAMP-PKA-CREB信號通路中，與中劑量錳處理組(500μM)相比，抑制劑組cAMP、PKA、pCREB和BDNF蛋白含量顯著

6、上升(P＜0.05)，PDE4蛋白表達水平顯著降低（P＜0.05）;在凋亡蛋白中，抑制劑組的促凋亡蛋白Bax含量顯著低于中劑量錳處理組(P＜0.05)，而抗凋亡蛋白Bcl-2表達水平顯著高于中劑量染錳組（P＜0.05）。
　　5.隨著染錳濃度的升高，PC12細胞凋亡率顯著上升。與對照組相比，隨著錳暴露濃度升高，不同濃度錳處理組細胞凋亡率增加（P＜0.05)。與中劑量錳處理組相比，用Rolipram預先處理一小時后的抑制劑組細胞凋亡

7、率下降(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.染錳可導致體外培養(yǎng)的PC12細胞形態(tài)改變，引起細胞不同程度的損傷，并降低細胞的存活率。染錳也可以導致體外培養(yǎng)的PC12細胞凋亡。抑制劑作用后可以降低PC12細胞凋亡水平。
　　2.錳可以影響cAMP-PKA-CREB信號轉導通路相關蛋白的含量，并改變其下游凋亡蛋白的表達水平。
　　3.抑制劑通過改善cAMP-PKA-CREB信號通路相關蛋白的表達以及凋亡蛋白的含量，從