腸道菌群DNA提取與鑒別技術(shù)研究.pdf

1、隨著糞菌移植在臨床上的廣泛應(yīng)用，使得腸道菌群的研究熱度不斷提高，腸道菌群在人體代謝活動(dòng)中所起的作用，以及其組成功能等，已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)。其在臨床上治療難治性腸病效果不斷得到認(rèn)證，且腸道菌群被證明和人體諸多疾病有密切聯(lián)系。在研究分析腸道菌群以及理應(yīng)腸道菌群進(jìn)行疾病治療的時(shí)候，通過(guò)何種方法提取獲得完整的腸菌，是正確認(rèn)識(shí)腸道菌群的先決條件。
　　目前，普遍的提取腸道菌群的方法是從糞便樣品中進(jìn)行分離，然而糞便樣品中的組份十分的復(fù)

2、雜，除包含有腸道菌群外，還包含有各類蛋白質(zhì)有機(jī)物、各類無(wú)機(jī)鹽、各類纖維素、食物未消化完全殘?jiān)?、腸道內(nèi)壁脫落細(xì)胞等。因此，在提取腸道菌群或是腸道菌群DNA時(shí)，需要對(duì)糞便樣品進(jìn)行一些預(yù)處理操作，通過(guò)預(yù)處理保證提取濃度的同時(shí)提高其純度。通過(guò)測(cè)序以及DGGE電泳等對(duì)腸道菌群DNA進(jìn)行檢測(cè)所需時(shí)間長(zhǎng)，操作繁瑣；光譜法作為一種純物理的光學(xué)方法，檢測(cè)快速，操作簡(jiǎn)便，可以達(dá)到對(duì)腸道菌群DNA進(jìn)行檢測(cè)和鑒別的目的。
　　本文利用正交分析方法對(duì)影響腸

3、道菌群DNA提取純度和濃度的各條件：樣品與生理鹽水比例、離心速度、離心時(shí)間、離心次數(shù)進(jìn)行了綜合全面地分析研究，得出了腸道菌群DNA提取純度和濃度隨各因素條件改變的變化趨勢(shì)；得出了各因素對(duì)腸道菌群DNA提取純度和濃度影響的先后次序；建立了一種最優(yōu)的提取腸道菌群DNA的預(yù)處理方法。對(duì)于不同物種的腸道菌群DNA，利用光譜法一次檢測(cè)即可得到紫外全波段的吸光度信息。通過(guò)主成分分析方法利用主成分得分值，結(jié)合歐氏距離對(duì)不同物種的腸道菌群DNA進(jìn)行分類