PRPS1在兒童急性白血病中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分 PRPS1在兒童急性白血病中的表達(dá)及臨床意義
　　目的：探討磷酸核糖焦磷酸合成酶1（PRPS1）基因在兒童急性白血?。ˋL）中的表達(dá)，分析其表達(dá)水平與 AL臨床指標(biāo)的相關(guān)性，初步探討PRPS1在AL中的臨床意義。
　　方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫組化（IH）的方法檢測(cè)176例兒童AL（初診126例，完全緩解50例）骨髓標(biāo)本中PRPS1的表達(dá)水平，收集患兒病程中診斷結(jié)果，臨床表現(xiàn)以及治療反應(yīng)等臨床特征信息，分析

2、其PRPS1表達(dá)水平與臨床特征的相關(guān)性。以21例非惡性血液病患兒骨髓作為對(duì)照組患兒。
　　結(jié)果：
　　（1）在 B-ALL組中，PRPS1初診組表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，同時(shí)高于完全緩解組（均P＜0.0001）；在T-ALL及AML組中，僅初診組與完全緩解組表達(dá)有顯著差異（均P＜0.0001）。
　?。?）在 B-ALL組中，PRPS1表達(dá)水平隨危險(xiǎn)度升高而增加（P＜0.01）；在T-ALL組中各危險(xiǎn)度分組之間則無(wú)明顯差

3、異（P＞0.05）；在AML組中，僅低危組與高危組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　（3）PRPS1高表達(dá)與B-ALL患兒的高WBC計(jì)數(shù)及MRD陽(yáng)性相關(guān)(P=0.020,P=0.026)。
　?。?） PRPS1與之前證實(shí)的復(fù)發(fā)相關(guān)基因NT5C2表達(dá)水平呈正相關(guān)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：PRPS1是兒童B-ALL預(yù)后不良相關(guān)危險(xiǎn)因素，有望成為判斷預(yù)后，指導(dǎo)個(gè)性化化療的指標(biāo)。
　　第二部分 PRPS1基

4、因過(guò)表達(dá)對(duì) Sup-b15及Raji細(xì)胞株生物學(xué)行為調(diào)控作用及機(jī)制研究
　　目的:利用慢病毒上調(diào)PRPS1基因的表達(dá)，研究其對(duì)Sup-b15及Raji細(xì)胞株增殖、凋亡及細(xì)胞周期的調(diào)控作用及機(jī)制。
　　方法:采用PRPS1過(guò)表達(dá)慢病毒感染Sup-b15及Raji細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)組 PRPS1過(guò)表達(dá)細(xì)胞；采用 GFP過(guò)表達(dá)慢病毒感染 Sup-b15及Raji細(xì)胞株作為對(duì)照組細(xì)胞；使用 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周

5、期及凋亡；采用 qRT-PCR、Western-blot方法檢測(cè)PRPS1及增殖、凋亡相關(guān)基因c-myc,cyclin E1,Bcl-2,CDK2,and caspase-3基因和蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　?。?）與對(duì)照組細(xì)胞相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞PRPS1 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著上升，P＜0.05；
　?。?）CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組 Sup-b15及 Raji細(xì)胞的增殖率均上升，與對(duì)照組相

6、比，P＜0.001；
　?。?）流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和周期結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組 Sup-b15及 Raji細(xì)胞的凋亡率均下降，P＜0.01；細(xì)胞周期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。
　　（4）與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組Sup-b15及Raji細(xì)胞的Bcl-2，CDK2基因和蛋白表達(dá)水平均顯著提高，P＜0.001； Caspase-3蛋白水平表達(dá)下調(diào)P＜0.01；C-myc及Cyclin E1未見(jiàn)明顯變化。
　　結(jié)