TCDD-MEHP對乳腺癌細胞MCF-7遷移和侵襲的影響及調控機制的初步探討.pdf

1、目的：
　　乳腺癌是威脅全球女性健康最常見的惡性腫瘤之一，目前已位居我國女性癌癥發(fā)病之首。轉移是導致90％以上乳腺癌患者死亡的主要原因。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展被認為是環(huán)境因素與基因共同作用的結果，目前研究認為，70%~95%的乳腺癌可能歸因于環(huán)境因素和生活習慣。本文旨在探索典型環(huán)境內分泌干擾物2,3,7,8-四氯代二苯并-對-二噁英（TCDD）與鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）代謝產物鄰苯二甲酸單（2-乙基己）酯（MEHP）單獨

2、以及共暴露對乳腺癌細胞MCF-7遷移和侵襲的影響，并初步探討其相關調控機制。
　　方法：
　　1. TCDD/MEHP對乳腺癌細胞MCF-7遷移和侵襲能力的影響
　　本次研究中毒物暴露計量分別為1nM、10nM和100nM的 TCDD，和/或100μM MEHP。染毒處理乳腺癌細胞MCF-724小時后，Transwell實驗檢測其對乳腺癌細胞遷移能力和侵襲性的影響。
　　2. TCDD/MEHP對乳腺癌細胞MCF

3、-7遷移和侵襲相關基因表達的影響
　　TCDD/MEHP染毒處理細胞24小時后，提取RNA，實時熒光定量PCR檢測遷移和侵襲相關基因MMP2、MMP9、SLUG以及VIM基因的mRNA表達水平。
　　3. TCDD可能通過活化AhR通路誘導乳腺癌細胞MCF-7的遷移和侵襲
　　為研究TCDD誘導MCF-7細胞遷移和侵襲的過程中是否活化了AhR，實時熒光定量PCR檢測1nM、10nM和100nM TCDD染毒處理24小時

4、后AhR和CYP1A1基因的mRNA表達水平。
　　化學合成AhR-siRNA和NC-siRNA轉染MCF-7乳腺癌細胞48小時后，實時熒光定量PCR檢測AhR基因的干擾效率。
　　將siRNA轉染MCF-7乳腺癌細胞48小時，并且100nM TCDD繼續(xù)染毒處理細胞24小時，Transwell實驗檢測乳腺癌細胞MCF-7遷移和侵襲能力的改變，并通過實時熒光定量PCR檢測MMP2、MMP9、SLUG以及VIM基因的mRNA表

5、達水平的改變。
　　結果：
　　1. TCDD/MEHP對乳腺癌細胞MCF-7遷移和侵襲的影響
　　Transwell遷移和侵襲實驗結果顯示，與對照組相比，1nM、10nM以及100nM TCDD染毒處理組均促進了乳腺癌細胞 MCF-7的遷移和侵襲能力（P<0.05），并且隨染毒劑量的升高，遷移和侵襲能力增強（P<0.05）。
　　與對照組相比，100μM MEHP染毒處理組對乳腺癌細胞MCF-7的遷移能力和侵襲

6、能力盡管沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05），但有增加的趨勢。
　　與對照組相比，100μM MEHP與100nM TCDD共同染毒處理組增加了乳腺癌細胞MCF-7的遷移能力和侵襲能力（P<0.05）。100μM MEHP與100nM TCDD共同染毒處理對乳腺癌細胞的遷移和侵襲能力與毒物的單獨處理效果不同（P<0.05）。
　　2. TCDD/MEHP對乳腺癌細胞MCF-7遷移和侵襲相關基因表達的影響
　　實時熒光定量PC

7、R結果顯示，與對照相比，1nM、10nM以及100nM TCDD處理組MMP2和MMP9基因的mRNA表達水平升高（P<0.05）。與對照組相比，100nM TCDD處理組SLUG和VIM基因的mRNA表達水平升高（P<0.05）。
　　與對照組相比，100μM MEHP處理組VIM基因的mRNA表達水平升高（P<0.05），而MMP2、MMP9和SLUG基因的mRNA表達水平無統(tǒng)計學差異（P>0.05），但有升高的趨勢。

8、　　與對照組相比，100μM MEHP與100nM TCDD共同染毒處理組MMP2、MMP9和VIM基因的mRNA表達水平升高（P<0.05）。
　　3. TCDD通過活化AhR通路促進乳腺癌細胞MCF-7的遷移和侵襲
　　為了研究TCDD誘導MCF-7細胞遷移和侵襲的過程中是否活化了AhR，實時熒光定量PCR結果顯示，與對照組相比，1nM、10nM以及100nM TCDD處理組AhR基因的mRNA表達水平無統(tǒng)計學差異（P>

9、0.05）。但與對照組相比，1nM、10nM以及100nM TCDD組CYP1A1基因的mRNA表達水平升高（P<0.05）。
　　siRNA轉染細胞后，實時熒光定量PCR結果顯示，AhR基因的mRNA表達水平降低了74%（ P<0.05）。Transwell遷移實驗和侵襲實驗結果顯示， AhR-siRNA轉染細胞后，100nM TCDD對乳腺癌細胞遷移和侵襲能力降低了（P<0.05）。AhR-siRNA轉染細胞后，實時熒光定量P

10、CR結果顯示，100nM TCDD降低了SLUG基因的mRNA表達水平（P<0.05），而對MMP2、MMP9和VIM基因的mRNA表達水平無統(tǒng)計學差異（P>0.05），但有降低的趨勢。
　　結論：
　　1. TCDD能夠活化AhR通路，并且增加MMP2、MMP9、SLUG以及VIM基因的表達，促進乳腺癌細胞MCF-7的遷移和侵襲。
　　2. TCDD可能通過促進MMP2、MMP9、SLUG以及VIM基因的表達，誘導乳