耐多藥產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌攜帶CTX-M、TEM、SHV耐藥酶基因的分布研究.pdf

1、目的:了解2014年7月至2014年11月瀘州醫(yī)學(xué)院（西南醫(yī)科大學(xué)）附屬醫(yī)院臨床分離的99株大腸埃希菌臨床分布情況、抗菌藥物的耐藥譜特征,檢測(cè)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)和相關(guān)耐藥酶基因CTX-M、TEM、SHV的分布情況，為瀘州地區(qū)醫(yī)院治療大腸埃希菌感染提供可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法：1.紙片擴(kuò)散法（ Kerby-Bauer法）：采用臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Instit

2、ute，CLSI）推薦的此方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)青霉素類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)、頭孢類(lèi)、碳青霉烯類(lèi)、磺胺類(lèi)、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)七類(lèi)16種臨床常用抗菌藥物的耐藥性，采用大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922進(jìn)行質(zhì)控。分析實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)頭孢類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、喹諾酮類(lèi)三類(lèi)抗菌藥物的耐藥現(xiàn)狀，判定實(shí)驗(yàn)菌株的耐藥模式分布。2.初步篩選及表型確證試驗(yàn)（ The Screening and Confirmatory test）：參照CLSI2012年推薦的標(biāo)準(zhǔn)，

3、采用此法檢測(cè)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶，將實(shí)驗(yàn)菌株分為ESBLs陽(yáng)性組和ESBLs陰性組，并運(yùn)用卡方檢驗(yàn)分析兩組菌株的耐藥性差異。3.PCR技術(shù)：首先提取產(chǎn) ESBLs菌株的質(zhì)粒，以設(shè)計(jì)的CTX-M、TEM、SHV三對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)blaCTX-M、blaTEM、blaSHV的攜帶情況。用紫外線檢測(cè)儀觀察電泳結(jié)果，選取陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物送檢做基因測(cè)序。結(jié)果：1.臨床分布情況：99株實(shí)驗(yàn)菌株主要分離于局部分泌物，占34.3

4、4％，其次為中段尿標(biāo)本，占27.27%；臨床科室分布較分散。2.藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果:（1）抗菌藥物的耐藥分布：哌拉西林85.86%（85株）、哌拉西林-他唑巴坦7.07%（7株）、復(fù)方新諾明71.72%（71株）、頭孢唑林66.67%（66株）、頭孢噻肟61.62%（61株）、頭孢他啶32.32%（32株）、頭孢曲松52.53%（52株）、頭孢吡肟12.12%（12株）、頭孢西丁5.05%（5株）、氨曲南27.27%（27株）、環(huán)丙沙星5

5、5.56%（55株）、左氧氟沙星38.39%（38株）、慶大霉素52.53%（52株）、阿米卡星3.03%（3株）、亞胺培南1.01%（1株）、美羅培南1.01%（1株）；（2）耐藥模式的分布情況:多耐藥菌株34株（34.34%），雙耐菌株22株（22.22%），單耐菌株24株（24.24%），全敏菌株19株（19.20%），其中多重耐藥模式的表現(xiàn)形式主要為 GEN+CTX/CAZ+CIP/LEV（31株，91.18%）。3.產(chǎn) ESB

6、Ls大腸埃希菌情況：（1）藥敏結(jié)果： ESBLs陽(yáng)性菌株對(duì)多數(shù)抗菌藥物而言，耐藥率明顯高于ESBLs陰性菌株；（2）不同耐藥模式菌株產(chǎn) ESBLs情況：多耐模式菌株產(chǎn) ESBLs率高于單耐模式菌株， X2=24.983，P＜0.001，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；雙耐模式菌株產(chǎn)ESBLs率高于單耐模式菌株，X2=9.299，P=0.002，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；（3）耐多藥產(chǎn) ESBLs菌株的藥敏結(jié)果：滿足條件的33株實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)亞胺培南、美羅培南全部敏感，對(duì)

7、頭孢西丁、哌拉西林-他唑巴坦也較敏感，對(duì)頭孢吡肟耐藥率偏高，對(duì)其余抗菌藥物嚴(yán)重耐藥4.ESBLs基因的檢測(cè)結(jié)果：（1）blaCTX-M、blaTEM、blaSHV的檢測(cè)情況：60株產(chǎn) ESBLs菌株中三種基因總檢出率為85%（51株），其中blaCTX-M檢出率70%（42株），blaTEM檢出率71.67%（43株）， blaSHV檢出率15.00%（9株）；（2）ESBLs基因與耐藥模式的關(guān)系：多耐模式菌株中以復(fù)合型ESBLs基因?yàn)?/p>

8、主（60.61%，20/33），其中blaCTX-M+TEM占80.00%（16/20）。雙耐模式菌株中也以復(fù)合型ESBLs基因?yàn)橹鳎?6.67%，12/18），其中blaCTX-M+TEM占50.00%（9/18）。結(jié)論：本地臨床分離的大腸埃希菌廣泛分布于臨床各科室，其耐藥情況嚴(yán)峻，產(chǎn)ESBLs菌株常見(jiàn)， ESBLs多見(jiàn)于多耐、雙耐模式菌株。耐多藥產(chǎn) ESBLs菌株對(duì)常用抗菌藥物嚴(yán)重耐藥,碳青霉烯類(lèi)是最后防線。單一型基因和復(fù)合型基因主