雷公藤對STZ誘導的1型糖尿病小鼠的療效研究.pdf

1、背景：1型糖尿病（Type1 diabetes mellitus，T1DM），又稱自身免疫性糖尿病，舊稱青少年型糖尿病?，F已少用此類稱呼，因為過去我們對糖尿病的認識不足，常常將 T1DM定位于兒童或青少年。T1DM患者大約占糖尿病病人總數的10％左右，根據2015年，國際糖尿病聯(lián)合會（IDF）發(fā)布的調查數據，全世界約有54萬2千個兒童患有1型糖尿病。糖尿病的主要危害是長期的高血糖所引起的血管及臟器損傷，造成患者患有一種或幾種糖尿病的慢性

2、并發(fā)癥。常見的如心血管疾病、糖尿病腎病等，嚴重影響患者的生活質量甚至最終導致死亡。與2型糖尿病的發(fā)病機制相比，T1DM的有很大的不同，根本上是由于自身免疫性疾病所導致。機制可能是由于自身免疫系統(tǒng)破壞了產生胰島素的胰島β細胞而引起，主要特點為胰島素分泌的缺失，因此患者必須注射胰島素，并且依賴終身。β細胞是胰島細胞的重要構成部分，約占胰島細胞的近80%。某些病毒會(如腮腺炎病毒、柯薩奇 B4病毒或風疹病毒等)侵犯感染胰島細胞，有些毒性化學物

3、質(如吡甲硝苯脲，鏈脲佐菌素，四氧嘧啶等)也會對胰島β細胞損傷，造成自身非免疫性損傷，或者因β細胞的破壞，釋放出一些致敏蛋白從而引起自身免疫性的損傷(其中包括細胞免疫和體液免疫的共同參與)，引發(fā)胰島的自身免疫性炎癥損傷和凋亡，導致胰島β細胞的嚴重破壞。其中鏈脲佐菌素(STZ)是一項技術非常成熟的動物糖尿病模型建造試劑，對胰島β細胞具有特異性的毒性殺傷作用。多次中等劑量的注射的方法可以使嚙齒類動物的β細胞大量較長時間的破壞，持續(xù)胰島炎癥反

4、應，與人的T1DM發(fā)病過程較類似。免疫抑制劑用于結締組織病和自身免疫病等的治療。雷公藤又名黃藤，是我國傳統(tǒng)中草藥。衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，具有活血化瘀、清熱解毒、消腫散結等功效，還具有抗炎、治療神經性退化疾病等多種藥理活性。近年來在糖尿病腎病的領域中已有使用雷公藤制劑治療的相關臨床研究經驗分享報告。針對國內應用雷公藤多苷治療糖尿病腎病的薈萃分析顯示，雷公藤多苷能減少糖尿病腎病患者尿中的白蛋白含量，而對血清肌酐（Scr）和血尿素氮則無明顯影響

5、。另有文獻報道，雷公藤另一種活性成分：雷公藤甲素，可以通過激活凋亡蛋白酶Caspases，從而誘導外周 T細胞的凋亡，而對胸腺細胞不產生影響。另有研究發(fā)現，其還能有效地通過激活Caspase－3，而誘導有抗原提呈作用的樹突狀細胞(DC)凋亡等從而起到抑制細胞免疫反應。對體液免疫的影響方面，Jianan Ren等研究表明雷公藤多苷可以有效使血清中的 C反應蛋白、腫瘤壞死因子和白介素-1β明顯減少。楊帆等人研究發(fā)現雷公藤制劑能夠通過抑制巨噬

6、細胞產生白細胞介素-6，而減輕炎癥反應。
　　目的：探討雷公藤對STZ損傷的β細胞功能的影響。
　　方法：⑴健康8周齡 C57BL/6小鼠在適應性喂養(yǎng)一周后進行隨機分組。除對照組，STZ組和STZ+雷公藤組小鼠均進行 STZ的注射造模。⑵STZ+雷公藤組每日上午9點行雷公藤藥物灌胃治療，其余兩組行生理鹽水灌胃做對照實驗。⑶每天檢查小鼠的生活環(huán)境狀況，如精神狀態(tài)、飲食情況、運動程度、皮毛光澤等。并每周監(jiān)測血糖、體重、飲食量等。

7、實驗結束時處死小鼠，分別收集血液和組織材料，妥善固定及冷凍。⑷將胰腺組織進行石蠟切片后經蘇木精—伊紅染色（ Hematoxylin-eosin,HE）染色，在顯微鏡下觀察胰島細胞變化情況。⑸血液離心后，檢測小鼠血漿上清液中胰島素(INS)及胰島素自身抗體（IAA）水平情況。
　　結果：①與對照組小鼠相比，STZ組小鼠的體重明顯減輕。②經過6周的雷公藤灌胃治療后，口服葡萄糖耐量試驗（oral glucose tolerance te

8、st，OGTT）測定血糖曲線下面積（area under the cure，AUC）顯示，與STZ組相比，STZ+雷公藤組小鼠糖耐量明顯改善。③與對照組小鼠相比，STZ組 INS明顯減少， STZ+雷公藤組 INS水平高于 STZ組，而STZ+雷公藤組IAA水平低于STZ組。④HE染色顯示，對照組胰島細胞致密，排列有序，間隙小，胞質核仁飽滿。STZ組胰島皺縮，細胞排列紊亂有空泡，核致密，胞漿少。STZ+雷公藤組胰島雖未有皺縮，但胰島細胞