IL-17A與巨噬細胞極化對實驗性眼新生血管形成的影響及機制研究.pdf

1、目的：新生血管（neovascularization，NV）形成作為許多眼病的重要并發(fā)癥被廣泛研究，越來越多的研究表明它與炎癥和免疫細胞密切相關。本課題擬通過體內(nèi)外研究探討白細胞介素-17A（interleukine-17A，IL-17A）在眼NV形成中對巨噬細胞（macrophage，Mf）活化和極性轉變，進而影響NV形成的作用和潛在機制。
　　方法：1.選擇 C57BL/6J小鼠分別建立氧誘導視網(wǎng)膜病變（oxygen-indu

2、ced retinopathy，OIR）模型、激光誘導脈絡膜NV形成模型（choroidal neovascularization，CNV），血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)高表達rho/VEGF轉基因小鼠模型。分別行玻璃體腔注射予 IL-17A中和抗體或重組IL-17A蛋白及PBS進行干預，全視網(wǎng)膜、脈絡膜鋪片免疫熒光染色比較各組與同模型同齡對照組眼NV形成情況。

3、>　　2.選擇7日齡C57BL/6J野生型鼠和IL-17A基因敲除鼠隨機分為正常對照組、OIR模型組，采用realtime RT-PCR法檢測比較NV形成中不同時點Mf極化相關炎癥因子表達；采用磁珠分離視網(wǎng)膜CD11b陽性細胞，流式細胞術檢測不同時點視網(wǎng)膜M1和M2型細胞比例。
　　3.體外培養(yǎng)RAW264.7小鼠Mf細胞系，予不同濃度（0、10、50、100ng/ml） IL-17A重組蛋白干預24小時，采用western bl

4、ot法檢測細胞MAPK各活性亞基、AKT蛋白磷酸化狀態(tài)及Notch1蛋白的表達；realtime RT-PCR法檢測Mf極化相關基因mRNA表達；采用多因子檢測試劑盒檢測培養(yǎng)上清中相關炎癥因子表達；采用Griess反應法檢測培養(yǎng)上清中一氧化氮（nitricmonoxide，NO）濃度。
　　4.體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs），分別予不同濃度（0

5、、10、50、100ng/ml）IL-17A重組蛋白或該蛋白干預RAW264.7細胞后的培養(yǎng)上清干預，采用CCK-8法檢測不同時間后HUVECs增殖情況，realtime RT-PCR檢測VEGFR1及VEGFR2 mRNA表達；采用Matrigel基質(zhì)膠檢測HUVECs管形成情況。
　　結果：IL-17A中和后的各模型小鼠視網(wǎng)膜或脈絡膜NV較同齡對照組顯著減少。IL-17A基因敲除鼠相較于野生型對照組M1相關細胞因子表達顯著下降