腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子在丙泊酚致新生鼠認知功能障礙中的作用機制研究.pdf

1、第一部分、丙泊酚對新生大鼠海馬proBDNF/mBDNF表達比例的影響與學習記憶功能的關系
　　目的：通過向新生大鼠單次，多次注射丙泊酚，模擬單次與多次丙泊酚麻醉，探討丙泊酚麻醉引起新生大鼠學習記憶功能障礙是否與其海馬mBDNF及proBDNF蛋白表達比例失衡有關。
　　方法：108只新生7d健康清潔級SD大鼠，體質量12～16g．雌雄各半，按照隨機數(shù)字表法分為3組：對照組(C組)、丙泊酚單次麻醉組(P1組)和丙泊酚多次麻醉

2、組(P2組)，每組36只。C組腹腔注射生理鹽水7.5ml/kg/d，連續(xù)7d；P1組腹腔注射生理鹽水7.5ml/kg/d，連續(xù)6d，第7天腹腔注射丙泊酚75mg/kg；P2組腹腔注射丙泊酚75mg/kg/d，連續(xù)7d。第7天各組大鼠分別注射完畢后間隔15min，每組隨機取6只新生大鼠，心室穿刺采血，測定血糖及血氣；于注射完畢后6h，24h，48h，72h每組隨機抽取6只大鼠，分離海馬組織。余下三組大鼠(n=6)喂養(yǎng)至出生第25天進行Mo

3、rris水迷宮實驗，測試空間學習記憶能力。水迷宮實驗結束后（30d）取大鼠海馬組織。采用RT-PCR檢測BDNF mRNA的表達，western blot法檢測mBDNF，proBDNF蛋白的表達，并計算出proBDNF/mBDNF蛋白表達的比值。
　　結果：三組新生大鼠血氣分析結果和血糖均在正常范圍內(nèi)，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。C組大鼠海馬BDNF mRNA與mBDNF蛋白表達水平逐漸上調(diào)，proBDNF蛋白表達水平與p

4、roBDNF/mBDNF比值逐漸下調(diào)。與C組比較，P1組各時間點海馬BDNF mRNA及mBDNF蛋白表達下調(diào)（P＜0.05），proBDNF/mBDNF比值升高（P＜0.05），大鼠幼年期逃逸潛伏期延長，空間探索時間縮短（P＜0.05）；P2組各時間點海馬BDNF mRNA及mBDNF蛋白表達顯著下調(diào)，proBDNF蛋白表達及proBDNF/mBDNF比值顯著升高（P＜0.05），大鼠幼年期逃逸潛伏期顯著延長，空間探索時間明顯縮短（P

5、＜0.05）。
　　結論：丙泊酚單次麻醉可引起新生大鼠海馬BDNF mRNA與mBDNF蛋白表達下調(diào)，而proBDNF無顯著改變，proBDNF/mBDNF蛋白表達比值輕微上調(diào)，進而導致大鼠幼年期逃逸潛伏期延長，空間探索時間縮短；丙泊酚多次麻醉還可引起大鼠海馬proBDNF蛋白表達明顯上調(diào)，proBDNF/mBDNF蛋白表達比值則進一步升高，最終導致大鼠幼年期逃逸潛伏期明顯延長，空間探索時間顯著縮短。
　　第二部分、mBDN

6、F/Akt/CREB和proBDNF/RhoA信號傳導失衡在丙泊酚致新生鼠認知功能障礙中的作用
　　目的：探討mBDNF/Akt/CREB和proBDNF/RhoA信號傳導失衡在丙泊酚致新生鼠認知功能障礙的作用。
　　方法：新生7d大鼠隨機分為6組(n=12)：C組連續(xù)7d腹腔注射生理鹽水；P1組注射生理鹽水6d后，第7天注射丙泊酚；P2組連續(xù)7d注射丙泊酚；T、K及D組連續(xù)7d注射丙泊酚后，第7天再分別注射P75NTR受體

7、抑制劑TAT-Pep5、TrkB受體抑制劑K252a與溶劑DMSO。各組隨機抽取6只大鼠進行血糖血氣的監(jiān)測，其余大鼠喂養(yǎng)至第25天進行Morris水迷宮實驗，測試空間學習記憶能力。水迷宮實驗結束后取海馬組織，通過Western blot檢測mBDNF/Akt/CREB及proBDNF/RhoA信號通路中蛋白的表達。
　　結果：六組新生大鼠血氣分析結果各指標和血糖均在正常范圍內(nèi)，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與C組比較，P1組與

8、P2組大鼠幼年期逃逸潛伏期延長，空間探索時間縮短（P＜0.05），且P2組改變更為顯著。與溶劑對照組（D組）比較，TrkB受體抑制劑組（K組）大鼠幼年期逃逸潛伏期延長，空間探索時間縮短(P＜0.05)；P75NTR受體抑制劑組（T組）大鼠幼年期逃逸潛伏期縮短，空間探索時間延長(P＜0.05)。與C組比較，P1組與P2組海馬mBDNF/Akt/CREB表達下調(diào)（P＜0.05），且P2組下調(diào)更為顯著；P1組與P2組海馬proBDNF/ Rh