版權(quán)說(shuō)明：本文檔由用戶(hù)提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的：本研究通過(guò)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白與 p53α真核表達(dá)載體構(gòu)建和表達(dá)，觀察p53α對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株H1299化療敏感性的影響，為化療和基因聯(lián)合治療肺腺癌提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
方法：通過(guò) RT-PCR法擴(kuò)增人肺腺癌細(xì)胞 A549中p53α基因，瓊脂糖凝膠回收、純化后產(chǎn)物與克隆載體 pMD18-T連接、轉(zhuǎn)化；將重組克隆載體與真核表達(dá)質(zhì)粒 pEGFP-N1分別用EcoRI和BamHI酶切，連接、轉(zhuǎn)化、測(cè)序等制備質(zhì)粒載體pEGFP-p53
2、α。脂質(zhì)體介導(dǎo)將p53α轉(zhuǎn)染H1299細(xì)胞，經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的p53α陽(yáng)性細(xì)胞克隆并擴(kuò)增培養(yǎng)。RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中p53α基因表達(dá)；Western Blot、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中TP53蛋白表達(dá)；采用 MTT實(shí)驗(yàn)和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè) CDDP、5-FU處理前后穩(wěn)定細(xì)胞株的藥物敏感性變化；DAPI染色法檢測(cè)化療藥CDDP、5-FU作用前后轉(zhuǎn)染細(xì)胞凋亡的變化。
結(jié)果：轉(zhuǎn)染p53α的H1299細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)TP53
3、蛋白。MTT實(shí)驗(yàn)提示H1299/pEGFP-p53α細(xì)胞存活率顯著低于H1299和H1299/ pEGFP-N1細(xì)胞（P<0.05），CDDP、5-FU的IC50分別下降了35.7％和45.5%。CDDP、5-FU化療后，H1299/ pEGFP-p53α細(xì)胞克隆形成率與對(duì)照組相比，前者的細(xì)胞克隆率顯著下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性（P<0.05）。DAPI染色法提示H1299/pEGFP-p53α比H1299和H1299/pEGFP-N1的細(xì)胞
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- RNA干擾抑制肺腺癌細(xì)胞HMGA1表達(dá)對(duì)化療敏感性的影響.pdf
- 重組人p53腺病毒對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)及化療敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- microRNA-451對(duì)胰腺癌細(xì)胞化療敏感性的影響.pdf
- 鼻咽癌細(xì)胞P糖蛋白表達(dá)及其對(duì)放化療敏感性的影響.pdf
- iASPP對(duì)不同p53背景的胃癌細(xì)胞順鉑化療敏感性的影響.pdf
- 硒蛋氨酸對(duì)胃癌細(xì)胞化療敏感性的影響.pdf
- 咖啡因?qū)53缺失型人肺腺癌細(xì)胞H1299的放射增敏作用及機(jī)制研究.pdf
- miR-513a-3p通過(guò)靶向GSTP1調(diào)控肺腺癌細(xì)胞的化療敏感性.pdf
- Med19基因敲除對(duì)不同P53背景乳腺癌細(xì)胞紫杉醇化療敏感性的影響.pdf
- polι對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞放、化療敏感性的影響.pdf
- 谷胱甘肽對(duì)胃腺癌SGC7901細(xì)胞化療敏感性的影響.pdf
- 非折疊蛋白反應(yīng)對(duì)乳腺癌細(xì)胞化療敏感性的影響.pdf
- 七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移能力及化療敏感性的影響.pdf
- ICBP90表達(dá)及其對(duì)膽囊癌細(xì)胞化療敏感性影響的研究.pdf
- 外源性FHIT基因?qū)ξ赴┘?xì)胞增殖和化療敏感性的影響.pdf
- 星形細(xì)胞上調(diào)基因-1表達(dá)下調(diào)對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖及化療敏感性的影響.pdf
- PGRMC1調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞化療敏感性的研究.pdf
- miR-21對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡和化療敏感性的影響及其作用機(jī)制.pdf
- rAd-p53對(duì)人肝癌細(xì)胞放射敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 米非司酮對(duì)人宮頸癌細(xì)胞化療敏感性的影響及其機(jī)理的探討.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論