ClC-3氯通道蛋白在腎上腺素能受體激動所致心肌肥厚中的作用研究.pdf

1、目的：獲得 ClC-3氯通道蛋白參與體內外腎上腺素能受體激動所致心肌肥厚的實驗證據。
　　方法：
　　(1)腎上腺素能受體激動劑腹腔注射構建心肌肥厚的小鼠模型。
　　(2)小動物超聲心動圖檢測小鼠室間隔，心室前壁厚度，獲得小鼠心臟指數(HW/BW)，結合心臟組織HE染色分析確定小鼠心肌肥厚的程度。
　　(3)免疫組織化學法檢測小鼠心肌ClC-3蛋白的表達變化。
　　(4)胰蛋白酶消化法原代培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，

2、視頻監(jiān)視其搏動情況。
　　(5)實時熒光定量PCR檢測細胞和小鼠心臟心肌肥厚標志基因心房利鈉因子（ANF）及ClC-3 mRNA的變化。
　　(6)蛋白免疫印跡技術（western blot）檢測細胞和小鼠心臟ClC-3蛋白表達的變化。
　　(7) Countstar自動細胞計數分析儀檢測分析細胞體積的變化。
　　結果：
　　(1)成功構建腎上腺素能受體激動劑誘導的心肌肥厚模型。超聲心動圖顯示單獨給予β腎上

3、腺素能受體激動劑異丙腎上腺素（ISO）或α腎上腺素能受體激動劑去甲腎上腺素（NE）處理的小鼠室間隔增厚，心室前壁厚度增加；小鼠心臟指數(HW/BW)亦明顯升高；HE染色結果顯示：ISO、NE處理組較對照組心肌結構松散、膠原纖維含量增多、心肌纖維明顯增粗，肌原纖維橫截面積明顯增大、細胞核聚集且增大。
　　(2)與對照組相比，ISO和 NE實驗組小鼠心肌肥厚標志基因ANF表達量增加，而ClC-3的mRNA表達量減少，免疫組化和蛋白免疫

4、印記結果同樣顯示ClC-3氯通道蛋白的表達量降低。
　　(3)β腎上腺素能受體拮抗劑普萘洛爾（Pro）能減輕ISO誘導的心肌肥厚，與對照相比，心臟指數HW/BW顯著下降，α腎上腺素能受體拮抗劑酚妥拉明（Phe）處理組與NE處理組相比，心臟指數HW/BW亦有降低的趨勢。
　　(4)普萘洛爾和酚妥拉明分別處理組小鼠心肌肥厚因子與模型組比較，心肌肥厚標志基因心房利鈉因子(Atrial natriuretic factor,ANF)