腫瘤相關巨噬細胞在膀胱癌中表達與臨床意義的研究.pdf

1、膀胱癌(bladder cancer，BCa)是泌尿系統最常見的惡性腫瘤之一，在美國及大多數國家中，以移行細胞癌為主，占膀胱癌的90％以上。目前臨床治療策略的主要依據是腫瘤分期，肌層浸潤性膀胱癌的首選治療方式為根治性膀胱切除術，而非肌層浸潤性膀胱癌一般推薦行經尿道膀胱腫瘤電切術。但在臨床工作中發(fā)現，部分非肌層浸潤性膀胱癌患者在術后短期內即很快發(fā)生復發(fā)、轉移，二次手術病理表現為肌層浸潤性。腫瘤復發(fā)和轉移是一個多階段、多步驟的復雜過程，而腫

2、瘤細胞所處的微環(huán)境在其中起重要作用，而巨噬細胞是腫瘤微環(huán)境中的一種重要細胞成分。近年來研究顯示腫瘤組織局部浸潤的巨噬細胞，即腫瘤相關巨噬細胞（tumor associated macrophages，TAMs），在腫瘤組織微環(huán)境中可以發(fā)生 M2型極化，從而發(fā)揮免疫抑制效應，促進瘤內血管新生、腫瘤增殖、侵犯和轉移。本研究旨在探討TAMs與膀胱癌發(fā)生、復發(fā)、進展的關系。
　　本研究分三部分：
　　第一部分M2型腫瘤相關巨噬細胞在

3、預測非肌層浸潤性膀胱癌初次復發(fā)的關系
　　目的：探討 M2型 TAMs浸潤程度及腫瘤臨床病理特征和非肌層浸潤性膀胱癌(non muscle-invasive bladder transitional cell cancer，NMIBC)術后初次復發(fā)之間的關系。
　　方法：回顧性分析我院診治的337例初發(fā)膀胱癌患者的臨床資料，以CD163為M2型TAMs分子標記物，采用免疫組化檢測膀胱癌組織中TAMs浸潤程度，采用χ2檢驗，K

4、aplan-Meier法進行生存分析并log-rank法檢驗，Cox回歸模型分析TAMs浸潤程度及其他膀胱癌復發(fā)危險因素，如年齡、腫瘤大小、病理分級、腫瘤數目等對腫瘤術后初次復發(fā)的影響。
　　結果：在單因素分析中，癌間質 CD163重度浸潤組術后復發(fā)率為36.2%，顯著高于輕、中度浸潤組的16.2%（P=0.001）；腫瘤大于3cm和腫瘤小于3cm患者復發(fā)率分別為14.0%和28.4%，差異具有顯著性（P=0.001）；多發(fā)腫瘤和

5、單發(fā)腫瘤患者復發(fā)率分別為26.7%和14.9%，差異具有統計學意義（P=0.046）；G1、G2、G3不同腫瘤病理分級復發(fā)率分別為25.0%、17.2%和22.1%，具有顯著性差異（P=0.008），多發(fā)非肌層浸潤性膀胱癌患者中，重度 CD163間質浸潤患者較輕中度更易復發(fā)（P=0.006），而單發(fā)患者中，腫瘤復發(fā)和間質浸潤程度無關（P=0.144）。腫瘤小于3cm患者中，復發(fā)和間質浸潤程度密切相關（P<0.01），而腫瘤大于3cm患者

6、中，復發(fā)和CD163間質浸潤程度無關（P=1.000）。腫瘤G1、G2級患者中，復發(fā)和CD163間質浸潤程度密切相關，有統計學差異（P=0.035），而在 G3患者中，與CD163間質浸潤程度無關（P=0.505）。Cox風險回歸模型分析顯示 CD163+細胞重度浸潤、腫瘤直徑>3cm、多發(fā)、高病理分級均為基層非浸潤性膀胱癌復發(fā)的危險因素（P均<0.05）?；颊咝詣e、年齡、癌巢CD163細胞浸潤程度無相關。
　　結論：膀胱癌間質中

7、 CD163重度浸潤者，膀胱癌術后更易復發(fā)，因此，癌間質163浸潤程度是非肌層浸潤性膀胱癌復發(fā)的潛在分子標記物。此外，腫瘤病理分級、腫瘤大小、腫瘤是否單發(fā)均為非肌層浸潤性膀胱癌復發(fā)的獨立危險因素。
　　第二部分腫瘤相關巨噬細胞、血管內皮生成因子和腫瘤微血管密
　　度在膀胱癌中的表達及臨床意義
　　目的：探討腫瘤相關巨噬細胞（tumor associated macrophages，TAMs）、血管內皮生成因子（vasc

8、ular endothelial growth factor，VEGF）、腫瘤微血管密度（MVD）和膀胱癌發(fā)生、進展的關系。
　　方法：以免疫組化方法檢測膀胱癌組織CD68+型TAMs浸潤程度，腫瘤微血管密度（以CD34為標記）及VEGF表達，每例標本均選用膀胱癌中心組織，并選正常膀胱黏膜作為對照。
　　結果：39例正常膀胱黏膜僅有6例見CD68呈1級(15.4%)，其余均為0級(84.6%)；153例癌組織中CD68呈0級

9、者5例(3.2%)，1級33例(21.6%)，2級69例(45.1%)，3級46例(30.1%)，膀胱癌中，CD68+TAMs表達較正常膀胱粘膜顯著增多（P<0.01）。肌層浸潤性膀胱癌和非肌層浸潤性膀胱癌比較，將CD68+TAMs表達程度0級、1級、2級合并，定為輕度浸潤，CD68+TAMs表達程度3級定位重度浸潤。輕度浸潤患者中，T1期膀胱癌98例，T2-T4期膀胱癌9例；重度浸潤患者中，T1膀胱癌31例，T2-T4期膀胱癌15例。

10、肌層浸潤性膀胱癌患者中，CD68+TAMs浸潤程度明顯升高，兩組比較有明顯統計學差異（P<0.01）。腫瘤微血管密度與膀胱癌中 CD68+TAMs浸潤程度密切正相關（r值=0.414，P<0.01），VEGF和CD68+TAMs浸潤程度也密切正相關（r值=0.333，P<0.01）。
　　結論：膀胱癌組織中TAMs的浸潤程度、MVD和VEGF表達水平較正常膀胱組織顯著增高，提示TAMs可能參與膀胱癌的發(fā)生。CD68+TAMs的浸潤

11、程度與腫瘤血管密度、VEGF表達水平和膀胱癌腫瘤分期密切相關，TAMs參與膀胱癌的進展，TAMs浸潤程度可以作為預后判斷的一項臨床指標。
　　第三部分膀胱癌組織微環(huán)境中單核巨噬細胞的特性分析
　　目的：探討膀胱癌組織微環(huán)境中CD163+/CD206+單核巨噬細胞的表達特性。
　　方法：本部分通過收集膀胱癌組織樣本，利用熒光顯微鏡觀察腫瘤組織中CD163+細胞表達；通過流式細胞檢測技術分析膀胱癌癌組織和癌旁正常組織中浸潤

12、的CD45+CD14+CD163+細胞亞群表達情況，并分析與免疫和血管生成相關的分子表達情況；利用小鼠膀胱癌細胞株MB49皮下接種C57/BL6小鼠，構建荷瘤小鼠模型，以流式細胞技術檢測不同時期荷瘤小鼠 CD11b+F4/80+CD206+單核巨噬細胞表達的動態(tài)變化。
　　結果：腫瘤癌灶浸潤的CD45+CD14+CD163+單核巨噬細胞亞群比例較癌旁組織顯著增高，兩者具有顯著性差異；無論癌組織還是癌旁組織，CD45+CD14+CD