鵜鶘的性別鑒定方法建立及其遺傳聚類(lèi)分析.pdf

1、鵜鶘是我國(guó)二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，屬于單態(tài)性鳥(niǎo)類(lèi)，即為雌雄同型，很難根據(jù)外表特征直接判定性別，在繁殖育種中時(shí)常發(fā)生錯(cuò)配的現(xiàn)象，動(dòng)物園鵜鶘的繁育效率較低。以保守基因 CHD鑒別鳥(niǎo)類(lèi)性別的原理是 CHD有兩個(gè)同源拷貝 CHD-W和 CHD-Z，CHD-W和CHD-Z基因的外顯子大小相近，內(nèi)含子長(zhǎng)度卻不同。因此利用PCR擴(kuò)增反應(yīng)對(duì)其內(nèi)含子部分進(jìn)行擴(kuò)增來(lái)判斷鳥(niǎo)類(lèi)性別。若PCR結(jié)果顯示一條帶，即為CHD-Z，可判斷為雄性個(gè)體，若顯示兩條帶，即為 CHD-Z

2、、CHD-W，可判斷為雌性。目前廣泛使用的PCR引物P2/P8、2550F/2718R在鵜鶘性別鑒定上不特異，因此本研究目的在于設(shè)計(jì)特異于鵜鶘性別鑒定的引物，以便穩(wěn)定、可靠地鑒定出鵜鶘性別，提高鵜鶘的繁殖效率。
　　本實(shí)驗(yàn)利用2550F/2718R對(duì)鵜鶘的基因組擴(kuò)增，經(jīng)回收測(cè)序得到鵜鶘的CHD基因片段序列，再用Chromos軟件、DNAstar軟件包以及NCBI中的Blast與ClustalW進(jìn)行比較分析，設(shè)計(jì)出鵜鶘的特異性引物。

3、本實(shí)驗(yàn)共設(shè)計(jì)出13對(duì)引物，其中的3對(duì)是CHD-Z基因特異引物，7對(duì)是CHD-W基因特異引物，3對(duì)是CHD基因特異引物。通過(guò)對(duì)鵜鶘個(gè)體性別的的驗(yàn)證結(jié)果表明，引物組合 Z2/W3、Z3/W3的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率為100％、90.47%；引物T2、T3生物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率為95.23%、100%。另外，引物在DNA模板濃度為1ng/μL時(shí)，引物能夠依然有效。因此，本實(shí)驗(yàn)所建立的研究方法特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確率高，可運(yùn)用于鵜鶘的性別鑒定。
　　對(duì)本實(shí)驗(yàn)中得到的