土槿乙酸對NC-Nga小鼠特應性皮炎的作用及其機制研究.pdf

1、目的：本文研究傳統中藥土槿皮有效成分土槿乙酸（PB）對NC/Nga小鼠特應性皮炎（AD）的治療作用，并初步探討其作用機制。
　　方法：
　　1.體內研究
　　1.1 PB對NC/Nga小鼠AD的藥效學研究:灌胃給藥觀察不同劑量的PB（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）對NC/Nga小鼠AD作用后的皮損炎癥評分、體重變化、脾臟指數、血清IgE含量， H&E染色檢測皮膚組織病理學變化。
　　1.2 RT-

2、PCR法檢測不同劑量PB對NC/Nga小鼠脾臟及皮膚組織中T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4、ASC、caspase-1、IL-1β、NLRP3、PPAR-γ、PPAR-δ、TLR-2、TLR-4、IL-17a、IL-17Ra、IL-22mRNA基因表達的影響。
　　1.3 ELISA法檢測不同劑量PB對NC/Nga小鼠血清IgE和相關細胞因子IL-1β、IL-17和IL-22含量的影響。
　　1.4 Wester

3、n-blot法檢測不同劑量PB對NC/Nga小鼠脾臟磷酸化AKT(Ser473)、RSK-2及磷酸化ⅠκBα(Ser32/Ser36)蛋白表達的影響。
　　2.體外研究
　　2.1 MTT法檢測PB體外對小鼠胸腺和脾臟細胞的毒性及對淋巴細胞增殖抑制作用。MTT法測定PB在體外對小鼠胸腺和脾細胞的毒性作用，并分析刀豆蛋白A（ConA）及脂多糖（LPS）誘導的小鼠T淋巴細胞和B淋巴細胞的增殖抑制作用。
　　2.2熒光素酶報

4、告基因檢測 PB對轉染報告基因質粒的 RAW264.7細胞PPAR-γ轉錄激活。
　　結果：
　　1.不同劑量PB（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）灌胃給藥后，中、高劑量組明顯改善NC/Nga小鼠的體重下降、脾指數升高；H&E染色顯示中、高劑量組能明顯減輕NC/Nga小鼠的表皮增厚和水腫，減少炎癥細胞浸潤，以上證明PB對NC/Nga小鼠AD具有顯著的治療作用。
　　2.RT-PCR和ELISA結果顯示PB

5、能夠下調炎癥因子TNF-α及炎癥小體NLRP3、IL-1β、Caspase-1的基因表達；抑制IL-22和IL-17a的表達和分泌；同時促進PPAR-γ和PPAR-δ基因表達；抑制TLR-2和TLR-4基因的表達以及NF-κB通路信號分子Ⅰ-κBα的活性表達；此外，PB還能明顯抑制AKT活化及RSK-2表達，通過多個作用靶點，從而調節(jié)機體免疫-炎癥反應網絡。
　　3.MTT法檢測發(fā)現，PB在體外對小鼠胸腺和脾淋巴細胞無明顯的細胞毒

6、性，IC50>1mmol/L，優(yōu)于陽性藥霉酚酸酯（23.22μmol/L），呈現時間-劑量依賴性地抑制ConA誘導的T細胞增殖，同時，對LPS誘導的B淋巴細胞增殖亦表現出一定程度的抑制作用，但其效應低于陽性對照藥，提示 PB可能選擇性抑制 T細胞活化增殖。熒光素酶報告基因分析，PB能夠激活RAW264.7細胞中的PPAR-γ轉錄活性，上調PPAR-γ表達。
　　結論：PB對 NC/Nga小鼠 AD有良好的治療效果，能夠通過抑制 I