Wnt-β-catenin信號通路調控皮膚成纖維細胞中FGF信號反饋激活的機制研究.pdf

1、實驗目的：
　　本研究旨在探討bFGF調控的基因庫并且進一步確定在人成纖維細胞中參與細胞遷移的靶分子。
　　實驗方法：
　　我們采用RNA-Seq轉錄組學技術鑒定出在bFGF處理后，有顯著性差異的基因和許多信號通路，并且采用qRT-PCR進一步驗證。之后，我們采用Westernblot實驗檢測受bFGF和Wnt通路調控的關鍵蛋白，用大鼠皮膚創(chuàng)傷模型檢測Wnt信號通路在皮膚愈合中所起的作用。運用小干擾RNA實驗抑制內源性

2、的β-catenin，同時進一步采用RNA-Seq轉錄組學技術鑒定出在β-catenin干擾后，總的轉錄組的變化情況。
　　實驗結果：
　　RNA測序實驗結果顯示在bFGF處理后，Wnt信號通路的基因發(fā)生了改變，包括Wnt2b，Wnt3，Wnt11，T-cell factor7(TCF7)和Frizzled8(FZD8)。并且，在LiCl(Wnt通路激活劑)與IWR-1(Wnt通路抑制劑)處理后，前者能促進成纖維細胞的遷移速

3、率，而后者相反。此外，在bFGF處理后，GSK3β在ser9位點的磷酸化和核內的β-catenin均能上升。分子和生化實驗提示PI3K信號能通過JNK激活GSK3β/β-catenin/Wnt信號通路，說明PI3K和JNK處于β-catenin的上游。β-catenin干擾后，細胞遷移速率降低。此外，RNA-Seq轉錄組學技術鑒定出β-catenin干擾后bFGF和FGF21的表達也下降。并且，Western blot實驗表明FGF21