小劑量阿糖胞苷體外誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤SMs-KCNR細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的：
　　通過對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤(NB)細(xì)胞系SMS-KCNR細(xì)胞的體外實驗，觀察小劑量阿糖胞苷(Ara-C)對SMS-KCNR細(xì)胞的形態(tài)、增殖、周期分布及與NB增殖分化密切相關(guān)的蛋白、基因(TrkA、MYCN)表達(dá)的影響，以探討小劑量Ara-C對NB細(xì)胞終末分化的誘導(dǎo)作用。
　　方法：
　　(1)MTS法檢測Ara-C對SMS-KCNR細(xì)胞增殖的影響，并獲得能誘導(dǎo)SMS-KCNR細(xì)胞分化的Ara-C的最佳濃度(20n

2、g/ml或30ng/ml)。(2)將培養(yǎng)24小時的SMS-KCNR細(xì)胞分成四組:A組（陰性對照組）、B組(Ara-C20ng/ml)、C組(Ara-C30ng/ml)和D組（全反式維甲酸ATRA1μmol/l作為陽性對照組），并進行加藥處理。(3)每日于倒置相差顯微鏡下觀察各組SMS-KCNR細(xì)胞的形態(tài)變化及增殖情況;采用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞周期分布;蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)、實時定量PCR(Real-Time P

3、CR)從蛋白及基因水平檢測TrkA、MYCN的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)小劑量Ara-C(＜50ng/ml)對SMS-KCNR細(xì)胞的增殖具有抑制作用，中大劑量Ara-C(≥50ng/ml)則有較明顯的細(xì)胞毒作用。(2)SMS-KCNR細(xì)胞經(jīng)小劑量Ara-C及ATRA處理6天后出現(xiàn)了明顯的形態(tài)學(xué)改變，即胞體變小、變圓，突起增多，部分軸突延伸超過胞體2倍以上，甚至相互交織成網(wǎng)狀，與正常神經(jīng)節(jié)細(xì)胞類似。(3)細(xì)胞周期檢測發(fā)現(xiàn)小

4、劑量Ara-C可將SMS-KCNR細(xì)胞阻滯于DNA復(fù)制期(S期)，抑制了細(xì)胞的有絲分裂(G2/M期下降P＜0.05)。(4)Western Blot及RT-PCR的檢測結(jié)果均顯示小劑量Ara-C能夠上調(diào)TrkA的表達(dá)（P＜0.05)，并下調(diào)MYCN的表達(dá)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　小劑量Ara-C與ATRA一樣對SMS-KCNR細(xì)胞的生長具有抑制作用，使其形態(tài)、周期分布及TrkA、MYCN的表達(dá)水平更接近正常神經(jīng)節(jié)細(xì)