K562細(xì)胞規(guī)模化培養(yǎng)及硒酸多糖誘導(dǎo)其凋亡的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以K562人慢性髓源白血病細(xì)胞為研究對(duì)象，研究了生物反應(yīng)器規(guī)?；囵B(yǎng)K562細(xì)胞的基本條件，另外通過MTT法、HE染色、流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光法和RT-PCR等手段從細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化、細(xì)胞周期、線粒體膜電位的變化、相關(guān)周期蛋白、相關(guān)凋亡蛋白及其基因的表達(dá)等方面探討了硒酸軟骨多糖對(duì)K562細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用及其作用機(jī)理。
　　首先，對(duì)生物反應(yīng)器規(guī)?；囵B(yǎng)K562細(xì)胞的基本條件，即初始密度、培養(yǎng)基pH值和攪拌速度進(jìn)行了研究，結(jié)果表

2、明，K562細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)的最佳條件為:細(xì)胞初始密度2.5×105個(gè)/mL，培養(yǎng)基pH值7.4，攪拌速度70r/min，該條件下細(xì)胞達(dá)到的最大生長(zhǎng)密度為1.57×106個(gè)/mL。
　　其次，研究了硒酸軟骨多糖對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制及凋亡誘導(dǎo)作用。通過MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)硒酸軟骨多糖能顯著抑制K562細(xì)胞的增殖，100μg/mL的軟骨多糖作用K562細(xì)胞48h后，抑制率可達(dá)到80％，且這種抑制作用呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴性和時(shí)間依賴性。通

3、過細(xì)胞形態(tài)顯微鏡觀察、HE染色和Hoechst33342/PI雙染發(fā)現(xiàn)硒酸軟骨多糖能夠使K562細(xì)胞出現(xiàn)體積縮小、染色質(zhì)固縮等典型的凋亡特征。通過流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn):(a)硒酸軟骨多糖能夠?qū)562細(xì)胞阻滯在S期，多糖處理48h后S期細(xì)胞數(shù)由40.75％增至62.93％;(b)羅丹明-123染色顯示強(qiáng)熒光部分的細(xì)胞數(shù)量降低了18％，細(xì)胞線粒體膜電位顯著下降。通過免疫熒光和ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，硒酸軟骨多糖處理后，細(xì)胞周期相關(guān)的CyclinA