血漿游離DNA在肝細胞肝癌中應用價值的探索研究.pdf

1、目的:循環(huán)腫瘤DNA(circulation tumour DNA, ctDNA)是指位于外周循環(huán)的游離腫瘤DNA片段。這類游離核酸不僅可以展現(xiàn)出腫瘤基因的全貌，同時也可以在一定程度上間接反映出腫瘤進展情況，異質性以及侵襲能力。如果能夠對這些腫瘤來源的ctDNA進行檢測分析，就有可能完成無創(chuàng)性的液體活檢，從而實現(xiàn)腫瘤檢測，藥物篩選，預后評估以及實時治療和系統(tǒng)性基因組演變的監(jiān)測。目前，ctDNA的一系列定量定性分析方法，特別是隨著技術革新

2、而衍生的二代測序技術，可以更好地發(fā)現(xiàn)并鑒別腫瘤相關的基因或是表觀遺傳學改變，從而擴展臨床應用前景。因此，主要針對肝細胞肝癌來進行相關的循環(huán)游離DNA(circulating cfDNA)的研究，其中研究主體分為兩類:一方面，匯總目前所有的關于HCC診斷的傳統(tǒng)cfDNA檢測方式，通過薈萃分析來首次評估這些傳統(tǒng)技術對HCC的診斷價值;另一方面，通過應用高通量測序技術，首次檢測HCC患者體內的，攜帶有HCC特異性突變位點的循環(huán)游離腫瘤DNA，

3、以此為媒介進行cfDNA診斷和預后效能的評估。
　　方法:在薈萃分析這部分內容中，所有納入的文獻都進行了QUADAS的指南評分，以判定納入文獻的質量。分析對象（文獻）被有效的分為了三個亞組進行分析，分別為:以cfDNA濃度測定為主的定量分析，以cfDNA甲基化檢測為主的定性分析，以及結合了甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)檢測的聯(lián)合分析亞組。統(tǒng)計分析軟件采用的是Stata12.0。綜合了說納入文獻的相關數(shù)據(jù)，

4、并匯總分析了聚合的敏感性，特異性，陽性擬然比(Positive likelihood ratios，PLRs)，陰性擬然比(Negativelikelihood ratios，NLRs)，診斷比值比(Diagnostic odds ratios，DORs)以及相對應的95％的置信區(qū)間（95％ confidence intervals，95％CIs）。數(shù)據(jù)聚合的方式采用的是雙邊線性混合模型。此外，匯總的受試者工作曲線(Summary re

5、ceiver operating characteristics，SROCs)和相對應的曲線下面積(Area under the curves，AUC)也被用來執(zhí)行分析該項技術的診斷效能。也單獨的針對異質性和發(fā)表偏倚進行了相關分析。在研究性論文部分，利用了MiSeqTM測序平臺，對納入研究的HCC患者的血漿和匹配的腫瘤組織進行了高通量的測序，測序目標為已被證實的且具有較常見突變位點的TERT, CTNNB1，and TP53基因。隨后也

6、對這些血漿中和腫瘤組織中的測序數(shù)據(jù)進行了比對分析，并評估這項檢測技術與受試對象的臨床病理資料和預后生存之間的關聯(lián)性。
　　結果:在薈萃分析中，總共有包括1280名HCC患者在內的2424名患者被納入研究，總研究數(shù)量為22例。定量分析聚合的敏感性，特異性，陽性擬然比，陰性擬然比，診斷比值比以及相對應的95％的置信區(qū)間分別為0.741(95％CI:0.610-0.840)，0.851(95％CI:0.718-0.927),4.970(

7、95％CI:2.694-9.169),0.304(95％CI:0.205-0.451),16.347(95％CI:8.250-32.388) and0.86(95％CI:0.83-0.89)。對于定量分析，聚合的敏感性，特異性，陽性擬然比，陰性擬然比，診斷比值比以及相對應的95％的置信區(qū)間分別為0.538(95％CI:0.401-0.669),0.944(95％CI:0.889-0.972),9.545(95％CI:5.298-17.1

8、96),0.490(95％CI:0.372-0.646),19.491(95％CI:10.458-36.329) and0.87(95％CI:0.84-0.90)。當結合了AFP以后的聯(lián)合分析亞組，聚合的敏感性，特異性，陽性擬然比，陰性擬然比，診斷比值比以及相對應的95％的置信區(qū)間分別為0.818(95％CI:0.676-0.906)，0.960(95％CI:0.873-0.988),20.195(95％CI:5.973-68.282)

9、,0.190(95％CI:0.100-0.359),106.270(95％CI:22.317-506.055) and0.96(95％CI:0.94-0.97)。
　　而在研究論文部分，總共納入的41名受試患者，都進行了術前的血漿游離DNA的高通量分析。在這些患者中，總共有8位患者在血漿中發(fā)現(xiàn)了HCC特異性的突變位點，其中有一位患者的基因突變，僅僅在血漿中被檢測出來。我們也同樣發(fā)現(xiàn)了，ctDNA中突變位點的檢測情況，其實和患者的腫

10、瘤血管侵犯有明顯關聯(lián)(P=0.041)，同時，也預測了患者更短的無腫瘤生存時間(P＜0.001)。也就是說，術中發(fā)現(xiàn)血管侵犯的患者，似乎更容易獲得ctDNA檢測的陽性率。而這一部分血漿中被檢測出有ctDNA突變的患者，術后腫瘤呈現(xiàn)更容易復發(fā)的態(tài)勢。此外發(fā)現(xiàn)，cfDNA的檢測和cfDNA總體的濃度之間，沒有明顯關聯(lián)性(P=0.884)。
　　結論:研究證實了，循環(huán)游離DNA的檢測對HCC的診斷而言，是有一定潛在應用價值的。只是對于傳

11、統(tǒng)的定量和定性分析而言，結果存在較大的不穩(wěn)健性。也就是說，單獨運用cfDNA的定量和定性分析，其結果有很高比例的假陽性或假陰性的概率出現(xiàn)，這將限制傳統(tǒng)游離DNA的檢測在HCC臨床運用的價值。但是，當結合了AFP檢測以后，相應的診斷效能和穩(wěn)健性都獲得較大的提升。此外，高通量測序技術輔助cfDNA的檢測可以直接克服此類檢測不穩(wěn)健性的弊端，并可以獲得很多傳統(tǒng)方式不能發(fā)現(xiàn)的信息。高通量測序的結果也發(fā)現(xiàn)，cfDNA中腫瘤特異性突變位點的檢測適合患