臨床肝癌組織核酸適配體的篩選及初步應用研究.pdf

1、肝癌是當今全世界發(fā)病率及致死率最高的癌癥之一。發(fā)展新型高效、快速的腫瘤標志物篩選方法，以及開發(fā)對腫瘤病理組織具有高特異性、高靈敏度并且化學性質穩(wěn)定的分子識別探針對于臨床腫瘤診斷、分類及判斷預后等具有非常重要意義。
　　近年來，基于protein-SELEX或者cell-SELEX技術篩選得到的核酸適配體作為一種新發(fā)展起來的識別分子在包括癌癥研究的許多領域獲得了廣泛的應用。但是protein-SELEX方法的篩選靶標為純化蛋白，而c

2、ell-SELEX技術以體外培養(yǎng)的腫瘤細胞系為篩選靶標，這些篩選目標物都無法真正模擬體內腫瘤的實際發(fā)生發(fā)展模式，忽略了腫瘤形成過程中會受到體內包括血管微環(huán)境和細胞外周基質等的多種因素影響，這使得基于cell-SELEX篩選得到的核酸適配體一般只能識別體外培養(yǎng)的腫瘤細胞系，難以真正實現(xiàn)對腫瘤臨床病理組織的檢測和診斷，嚴重限制了核酸適配體在腫瘤臨床領域的研究和應用。而tissue-SELEX技術以臨床腫瘤組織為篩選靶標，能獲得真正識別臨床腫

3、瘤病理組織的核酸適配體探針，在腫瘤標志物的發(fā)現(xiàn)、臨床診斷和分型研究中展示出了良好的潛力，但是相關研究目前還開展得太少，有待進一步推進。
　　本論文采用tissue-SELEX技術，以臨床肝癌組織切片為樣本，成功篩選得到能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織的核酸適配體，并對核酸適配體與靶標的結合性能進行了分析研究。
　　(1)基于tissue-SELEX技術，以臨床肝癌組織切片為靶標，癌旁正常肝組織為對照進行篩選。此外，我們還對篩選方法

4、進行了修改，利用前人篩選得到的核酸適配體BC15對組織中的相關位點進行了封閉，希望篩選得到的核酸適配體結合一個新位點。經過11輪不斷增加篩選壓力的反復篩選過程，成功鑒定出一條能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織的核酸適配體SW1。
　　(2)用固定的癌細胞系為模型，通過熒光共定位表征發(fā)現(xiàn)核酸適配體SW1的靶分子亞細胞定位在細胞核，而且不是核酸，可能是一種核酸結合蛋白;利用流式細胞術，我們測定出SW1對肝癌SMMC-7721細胞的解離常數(shù)在納

5、摩爾級別，展現(xiàn)出較強的親和力;競爭實驗表明我們篩選得到的核酸適配體SW1與其他研究組篩選得到的核酸適配體BC15的識別位點不相同。此外，通過組織芯片考察，核酸適配體對臨床肝癌組織的識別率達到了72.7％，且對來源于多種器官的腫瘤組織都有較強的結合能力。
　　綜合以上分析結果，我們篩選得到的核酸適配體SW1能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織，對于肝癌的臨床篩查和診斷有一定的輔助指導價值，而且由于SW1的靶分子為一種亞細胞定位在細胞核的蛋白質