子癇前期大鼠微循環(huán)改變及選擇素對其影響.pdf

1、目的：子癇前期(Preeclampsia, PE)是一種妊娠期并發(fā)癥，其臨床特點主要是孕20周出現(xiàn)的高血壓和蛋白尿，或合并其他系統(tǒng)的病變，比如血小板減少、肝酶升高、腎功能不全、肺水腫、視覺障礙和腦功能紊亂。子癇前期是導致母嬰不良妊娠結局的主要原因，其發(fā)病率逐年增長。研究發(fā)現(xiàn)子癇前期與母嬰將來罹患心血管疾病和代謝性疾病有關。炎癥反應、內皮細胞損傷和白細胞及血小板的活化可導致全身的微循環(huán)障礙，這是子癇前期的發(fā)病特點。選擇素介導炎癥時白細胞的

2、早期黏附，包括P-選擇素(P-selectin)、E-選擇素(E-selectin)和L-選擇素(L-selectin)。本實驗通過腹腔注射NO合酶抑制劑左旋亞硝基精氨酸甲酯(Nitro-L-arginine methylester, L-NAME)的方法建立子癇前期大鼠模型，擬通過觀察腸系膜微循環(huán)和胎盤超微結構改變，測定選擇素在子癇前期孕鼠的表達情況，探討子癇前期大鼠微循環(huán)改變及選擇素對子癇前期微循環(huán)障礙的影響，為子癇前期的發(fā)病提供新

3、的理論依據(jù)和診療思路。
　　方法：①購買10周齡的SD大鼠，雌雄各30只。按雌：雄比例為1:1合籠，觀察飼養(yǎng)籠內是否有陰道栓脫落，若看到有陰道栓，則規(guī)定為孕第1天。②30只孕鼠中隨機選取20只孕鼠用來建立子癇前期孕鼠模型，孕7-11天連續(xù)腹腔注射L-NAME，模型成功13只，其中選取10只作為子癇前期組。剩余10只孕鼠作為對照組，孕7-11天連續(xù)腹腔注射等量的生理鹽水。孕第5、9和17天定時測量兩組孕鼠尾動脈收縮壓(Systoli

4、c blood pressure, SBP)和收集24h尿液。模型成功標準是收縮壓升高30mmHg以上。③孕19天，麻醉兩組孕鼠，待麻醉成功后，使用WX-9B型微循環(huán)顯微鏡觀察腸系膜微循環(huán)，待觀察完畢后采血和胎盤組織。使用透射電鏡(transmission electron microscopy,TEM)觀察胎盤的超微結構改變，主要是觀察合體滋養(yǎng)細胞的變化。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent a

5、ssay, ELISA)測定血漿中可溶性 P-選擇素(soluble P-selectin, sP-selectin)、可溶性E-選擇素(soluble E-selectin, sE-selectin)和L-選擇素(soluble L-selectin, sL-selectin)的含量，使用免疫組織化學技術(Immunohistochemistry, IHC)觀察P-selectin和E-selectin在胎盤的表達情況，使用軟件圖像分

6、析得出平均光密度值(Mean optical Density, MOD)。④采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)進行正態(tài)性檢驗和方差齊性分析后，對于符合正態(tài)性檢驗和方差齊的數(shù)據(jù)則使用兩獨立樣本的t檢驗，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)性檢驗但方差不齊則使用兩獨立樣本的t'檢驗或非參數(shù)檢驗，若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)性檢驗則采用兩獨立樣本的非參數(shù)檢驗。取α=0.05作為檢驗水準，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：⑴收縮壓和24h尿蛋

7、白濃度：子癇前期組與對照組比較，兩組大鼠孕5天的收縮壓和24h尿蛋白濃度無明顯差異（均P>0.05）；子癇前期組孕鼠孕9天、孕17天的收縮壓和24h尿蛋白濃度均高于對照組同日的收縮壓和24h尿蛋白濃度，差異有統(tǒng)計學意義（均P<0.001）。⑵對照組的腸系膜微血管壁整齊光滑，形態(tài)柔和，自然彎曲，血管周圍無滲出；子癇前期組的腸系膜微血管壁迂曲，邊緣不整齊，血管周圍有少量滲出。⑵子癇前期組腸系膜微靜脈內可見大量白細胞貼壁滾動，滾動速度緩慢，白

8、細胞黏附于血管壁并聚集；對照組腸系膜微靜脈內僅有白細胞貼壁快速滾動，無白細胞貼壁黏附和白細胞聚集。⑶子癇前期組的毛細血管內可見紅細胞聚集，而對照組無紅細胞聚集。⑷對照組的胎盤合體滋養(yǎng)細胞內含有豐富的內質網和線粒體，細胞質內含有少量脂滴（空泡狀變性）；與對照組相比，子癇前期組的胎盤合體滋養(yǎng)細胞內的線粒體腫脹，內質網擴張，細胞質內可見大量脂滴。⑸孕鼠血漿中的sP-selectin、sE-selectin和sL-selectin的濃度，子癇前

9、期組均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（均P<0.001）。⑹IHC:P-selectin和E-selectin在孕鼠胎盤中表達主要位于合體滋養(yǎng)細胞和血管內皮細胞的細胞膜及細胞質。P-selectin和E-selectin在子癇前期組的MOD均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（均P<0.001）。
　　結論：①腹腔注射NO合酶抑制劑L-NAME的方法成功建立子癇前期大鼠模型。②子癇前期大鼠腸系膜微循環(huán)的變化，說明母體全身出現(xiàn)微循環(huán)障礙。③

10、sP-selectin、sE-selectin和sL-selectin在子癇前期大鼠血漿中的高表達，與腸系膜微循環(huán)改變可能有關，其可能通過參與白細胞活化、內皮細胞功能紊亂、炎癥反應和血小板活化，導致子癇前期大鼠的機體微循環(huán)障礙。④子癇前期大鼠胎盤滋養(yǎng)細胞超微結構變化說明胎盤微循環(huán)障礙。⑤P-selectin和E-selectin在子癇前期大鼠胎盤中的高表達，與胎盤滋養(yǎng)細胞超微結構改變可能有關，其可能參與胎盤血管內皮細胞功能紊亂和血小板活