降粘膠囊指紋圖譜分析及藥效學(xué)研究.pdf

1、目的:以降粘膠囊制劑為研究對象，建立HPLC指紋圖譜及多成分含量測定分析方法，從定性定量的角度全面的控制其內(nèi)在質(zhì)量，對降粘膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提升;建立動物病理模型，對降粘膠囊進(jìn)行抗血栓藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，改善微循環(huán)障礙實(shí)驗(yàn);為該制劑臨床用藥提供依據(jù)。
　　方法:(1)采用HPLC法，優(yōu)化提取方法及色譜條件，選用AgilentC-18(4.6mm×250 mm，5μ m)色譜柱，以乙腈-0.05％磷酸水為流動相，梯度洗脫，柱溫25℃，流速1m

2、L·min-1，進(jìn)樣量10μ L，波長272nm;建立指紋圖譜方法。運(yùn)用國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)軟件A版”評價(jià)10批不同批次降粘膠囊指紋相似度，采用對照品比對法、制劑和藥材相關(guān)性分析法，對復(fù)發(fā)制劑指紋中指紋峰進(jìn)行藥材歸屬。(2)對降粘膠囊進(jìn)行含量測定研究，以葛根素、丹參酮HA、柚皮苷為指標(biāo)性成分，建立HPLC方法，對3種成分含量進(jìn)行同時(shí)測定。（3)采用小鼠腹腔注射角叉菜膠，建立小鼠尾部血栓模型，通過不同給藥組血栓長

3、度比較，考察降粘膠囊對體內(nèi)血栓形成的影響;采用局部滴加50ug·mL-1的鹽酸異丙腎上腺素溶液0.5mL，建立大鼠腸系膜微循環(huán)障礙模型，通過BI-2000型微循環(huán)觀測系統(tǒng),觀察腎上腺素滴注前后不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)、不同組間降粘膠囊對大鼠腸系微血管管徑、血液流及血液流速態(tài)的影響。
　　結(jié)果:(1)建立了降粘膠囊HPLC指紋圖譜，不同批次10批降粘膠囊制劑相似度在0.97～0.99之間，該方法有較好的精密度及準(zhǔn)確度，符合指紋圖譜要求。以葛根素

4、為參照峰，標(biāo)記了28個共有峰，4個成分得已鑒定，其中8號為葛根素，23號為甘草酸，24號為甘草苷，28號為丹參酮HA。對降粘膠囊指紋共有峰進(jìn)行了藥材歸屬分析，23個峰歸屬到具體藥材。(2)優(yōu)化建立了HPLC法同時(shí)測定葛根素、丹參酮HA、柚皮苷3個主要指標(biāo)成分同時(shí)含量測定的方法，其精密度、穩(wěn)定性符合要求，重復(fù)性好，葛根素在0.1041～0.7286mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;柚皮苷在0.1040～0.7280mg·mL-1范圍內(nèi)呈

5、良好線性關(guān)系;丹參酮HA在4.6968～12.5248ug·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;回收率試驗(yàn)結(jié)果表明:均符合標(biāo)準(zhǔn)，RSD均＜3％。三批降粘膠囊平均含量分別為:葛根素的8.0255mg·g-1、柚皮苷14.4624mg·g-1、丹參酮HA156.6844ug·g-1。(3)建立了小鼠尾部血栓模型，試驗(yàn)結(jié)果表明:降粘膠囊各劑量組均能不同程度抑制對角叉菜膠所致小鼠尾靜脈體內(nèi)血栓的形成;降粘膠囊能不同程度的改善腎上腺素所致大鼠腸系膜微循

6、環(huán)障礙;給藥組與生理鹽水組比較(p＜0.05)，均有顯著性差異。
　　結(jié)論:(1)研究建立的降粘膠囊指紋圖譜分析方及多成分含量方法法簡便，穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于降粘膠囊的質(zhì)量控制;丹參、葛根、枳殼等藥材的化學(xué)成分信息對降粘膠囊指紋圖譜的貢獻(xiàn)較大，部分藥材在指紋中未得到體現(xiàn)。(2)抗血栓實(shí)驗(yàn)表明，腹腔注射角叉菜膠能準(zhǔn)確的復(fù)制小鼠尾部血栓模型，降粘膠囊具有抑制改善血栓的作用;微循環(huán)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:通過觀察大鼠腸系膜微血管管