尼洛替尼聯(lián)合三氧化二砷對K562細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的:本研究通過觀察尼洛替尼(AMN107)聯(lián)合三氧化二砷(ATO)對慢性髓細胞白血病細胞株K562細胞增殖及凋亡的影響，比較藥物干預前后BCR-ABL基因表達水平的變化，旨在探討兩藥是否具有協(xié)同作用，并進一步探討其作用機制。為尋找慢性髓細胞白血病治療新方法提供理論基礎。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)K562細胞，分為對照組與實驗組。對照組只加培養(yǎng)基及細胞;實驗組分為AMN107組、ATO組和AMN107+ATO組。用不同濃度的

2、AMN107(2.5、5.0、10.0μmol/L)、ATO(1.0、2.5、5.0μ-mol/L)和AMN107+ATO(選擇AMN107組和ATO組的最佳濃度)連續(xù)作用于K562細胞72h。MTT法檢測藥物對K562細胞增殖的影響;AnnexinⅤ-FITC/PI染色法流式細胞儀檢測藥物對K562細胞凋亡的影響;流式細胞儀檢測藥物對K562細胞的細胞周期的影響;RT-PCR檢測各組K562細胞BCR-ABL融合基因表達水平的變化。<

3、br>　　統(tǒng)計學軟件spss13.0分析結果。
　　結果:
　　1、AMN107和ATO對K562細胞增殖的影響
　　同一時間、不同濃度AMN107作用于K562細胞，細胞生長抑制率隨濃度的增加而逐漸升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。同一濃度、不同時間點AMN107作用于K562細胞，細胞生長抑制率隨時間的延長而逐漸增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　同一時間、不同濃度ATO作用于K562細胞，細

4、胞生長抑制率隨濃度的增加而逐漸升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。同一濃度、不同時間點ATO作用于K562細胞，細胞生長抑制率隨時間的延長而逐漸增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　同一濃度，不同時間點的AMN107聯(lián)合ATO作用于K562細胞，細胞生長抑制率隨時間的延長而逐漸增加，較兩藥單獨應用能更快達到IC50，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。同一時間點，AMN107聯(lián)合ATO較兩藥單獨應用細胞生長抑制率更高，差

5、異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2、AMN107和ATO對K562細胞凋亡的影響
　　1 umol/L ATO作用于K562細胞48h后細胞凋亡率較對照組無明顯差異(P＞0.05)。2.5umol/L和5umol/LATO作用于K562細胞48h后細胞凋亡率較對照組明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且細胞凋亡率隨濃度的增加而增加。
　　不同濃度AMN107作用于K562細胞，細胞凋亡率隨濃度的增加而逐

6、漸增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　AMN107聯(lián)合ATO組較兩藥單獨應用細胞凋亡率更高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3、ATO對K562細胞周期分布的影響
　　流式細胞術檢測細胞周期分布，結果顯示，不同濃度ATO作用于K562細胞后，停滯在G0/G1期的細胞比例隨藥物濃度的增加逐漸增加，S期、G2/M期細胞比例逐漸減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4、AMN107和ATO對K

7、562細胞中BCR-ABL基因表達的影響
　　同一時間、不同濃度AMN107作用于K562細胞，BCR-ABL基因的表達水平隨藥物濃度的增加呈逐漸下降的趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。同一濃度、不同時間點AMN107作用于K562細胞，BCR-ABL基因的表達水平隨時間的延長呈逐漸下降的趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　同一時間、不同濃度ATO作用于K562細胞，BCR-ABL基因的表達水平隨藥物濃度的增

8、加呈逐漸下降的下降的趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。同一濃度、不同時間點ATO作用于K562細胞，BCR-ABL基因的表達水平隨時間的延長呈逐漸下降的趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　同一濃度，不同時間點AMN107聯(lián)合ATO作用于K562細胞，BCR-ABL基因的表達水平隨時間的延長呈逐漸下降的趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。同一時間點，AMN107聯(lián)合ATO組能夠較兩藥單獨應用更深的抑制BCR-AB

9、L基因的表達水平，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　1、AMN107對K562細胞具有抑制增殖、誘導凋亡的作用且呈時間與劑量依賴性，其機制可能與BCR-ABL基因表達下調有關。
　　2、ATO對K562細胞具有抑制增殖、誘導凋亡的作用且呈時間與劑量依賴性，其機制可能與ATO促使停滯在G0/G1期的K562細胞比例增加，BCR-ABL基因表達下調有關。
　　3、AMN107與ATO兩者聯(lián)合作用于