IGF-1對脂肪變肝細胞p38MAPK表達和生化指標(biāo)的影響.pdf

1、目的：研究IGF-1對油酸誘導(dǎo)的脂肪變肝細胞p38MAPK表達及其生化指標(biāo)的影響，旨在探討IGF-1在非酒精性脂肪性肝病中的作用，進而為NAFLD的臨床防治提供新思路。
　　方法：人肝癌細胞株HepG2，用含10％的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。然后以不同濃度油酸誘導(dǎo)HepG2細胞發(fā)生脂肪變性，采用MTT法探索最佳造模濃度。進行所有實驗之前，均將HepG2細胞置于無血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h。將HepG2細胞隨機分為3組：正常

2、對照組、油酸誘導(dǎo)組、油酸聯(lián)合IGF-1組。采用油紅O染色觀察各組細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積情況；Western Blot檢測各組p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表達；采用生化試劑盒檢測各組細胞內(nèi)TG（甘油三酯）及上清液中ALT、AST的水平。
　　結(jié)果：
　　1、油酸對HepG2細胞株具有誘導(dǎo)作用，使其發(fā)生一定程度的脂肪變性，并可順利構(gòu)建肝細胞脂肪變模型。在油紅O染色之后，通過光學(xué)顯微鏡進行觀察，結(jié)果顯示肝細胞脂質(zhì)沉積并沒有出現(xiàn)

3、于正常對照組中；油酸誘導(dǎo)組在培養(yǎng)24h后可見細胞內(nèi)少量脂質(zhì)沉積，脂變率（10.37±1.79）%；隨著培養(yǎng)時間的增加，脂肪變程度逐漸加重，48h后脂質(zhì)沉積增多，脂變率（34.26±7.04）%；72h后則出現(xiàn)大量脂質(zhì)沉積，脂變率（75.63±12.03）%。通過對上述3個培養(yǎng)時點的對比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。油酸聯(lián)合IGF-1組與油酸誘導(dǎo)組相比，培養(yǎng)24h后其脂變率無明顯差異（P>0.05），48h、72h后油酸聯(lián)合IGF

4、-1組的脂變率明顯降低，分別為（28.76±7.12）%、（37.67±6.89）%，差異分別具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2、各組脂肪變肝細胞內(nèi)TG水平的比較
　　隨著培養(yǎng)時間的增加，油酸誘導(dǎo)組、油酸聯(lián)合IGF-1組細胞內(nèi)TG含量均有所增高，油酸誘導(dǎo)組內(nèi)各時點進行比較具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。油酸聯(lián)合IGF-1組和油酸誘導(dǎo)組各時點的TG含量明顯多于正常對照組，此差異比較明顯，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0

5、.01）。油酸聯(lián)合IGF-1組細胞在經(jīng)過48h、72h培養(yǎng)之后，細胞內(nèi)的TG含量明顯低于油酸誘導(dǎo)組，此差異比較明顯，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、各組培養(yǎng)上清液中ALT、AST含量的比較
　　隨著培養(yǎng)時間的增加，油酸誘導(dǎo)組、油酸聯(lián)合IGF-1組細胞上清液中的AST和ALT的含量明顯增加，在油酸誘導(dǎo)組中各時點之間的差異比較明顯，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。油酸聯(lián)合IGF-1組細胞在經(jīng)過48h、72h

6、培養(yǎng)之后，細胞上清液中ALT、AST含量明顯低于油酸誘導(dǎo)組，此差異比較明顯，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　4、各組細胞p-p38MAPK和p38MAPK蛋白表達水平的比較
　　各組細胞分別培養(yǎng)24小時、48小時和72小時之后，p38MAPK蛋白表達都比較明顯，但是各組之間的差異不明顯，不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　油酸聯(lián)合IGF-1組以及油酸誘導(dǎo)組p-p38MAPK均有表達，正常對照組無表達。油

7、酸誘導(dǎo)組72h時p-p38MAPK蛋白表達與24h、48h相比明顯增高（P<0.01）；油酸聯(lián)合IGF-1組內(nèi)各時點進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），然而與油酸誘導(dǎo)組培養(yǎng)72h后p-p38MAPK的蛋白表達（2.93±0.13）相比較，油酸聯(lián)合IGF-1組表達水平卻顯著降低（1.12±0.07），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：IGF-1可以改善肝細胞脂肪變的程度，明顯降低肪變肝細胞p-p38MAPK蛋白