二代測序技術在家族性非髓樣甲狀腺癌遺傳易感基因篩查中的應用.pdf

1、 分 類 號： 號：R736.1 學校代碼： 學校代碼：1 0 0 6 2 密 級： 級： 學 號： 號：2013602218 學位類別 學位類別： 科學學位? 專業(yè)學位? 學科門類： 學科門類：

2、醫(yī)學 醫(yī)學 碩 士 學 位 論 文 MASTER’S DISSERTATION 論文題目： 論文題目：二代測序 二代測序技術 技術在家族性非髓樣甲狀腺癌遺 在家族性非髓樣甲狀腺癌遺傳易感性篩查中的應用 傳易感性篩查中的應用 T I T L E Next Generation Sequencing Technology for Susceptible Gene Screening in Familial Non-medullary T

3、hyroid Carcinoma 一級學科： 一級學科：臨床醫(yī)學 臨床醫(yī)學 二級學科： 二級學科：腫瘤學 腫瘤學 論文作者： 論文作者：董 莉 指導教師： 指導教師：高 明 教授 教授 導師組成員： 導師組成員：鄭向前 鄭向前 于津浦 于津浦 于洋 于洋 天 津 醫(yī) 科 大 學 研 究 生 院 二〇一 二〇一六 年 五 月天津醫(yī)科大學碩士學位論文 I 中文摘要 目的 目的： 家族性非髓樣甲狀腺癌（familial non-medu

4、llary thyroid carcinoma, FNMTC）包括甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡癌、甲狀腺未分化癌，其特異性致病基因尚不清楚。隨著測序技術發(fā)展革新，二代測序技術以其高通量、平行測序及經(jīng)濟高效的特點得到廣泛的應用推廣。本研究通過篩選與甲狀腺癌遺傳易感性相關的基因，制備適用于非髓樣甲狀腺癌易感性篩查的二代測序試劑盒探針，應用于非髓樣甲狀腺癌遺傳易感基因的篩查，探討二代測序技術對非髓樣甲狀腺癌遺傳易感性篩查的價值。 方法： 方法：

5、 以甲狀腺癌相關的 31 個基因的全外顯子以及 RET基因的部分內(nèi)含子為目標區(qū)域制備二代測序試劑盒探針。 收集 47 例 FNMTC 及 16 例散發(fā)性非髓樣甲狀腺癌（sporadic non-medullary thyroid carcinoma, SNMTC）患者外周血，提取 DNA樣本， 利用探針， 與全基因組 DNA 雜交， 富集目標區(qū)域， 再利用 Illumina MiSeq第二代測序儀進行測序。測序數(shù)據(jù)分析采用 BWA al

6、igner 0.7.10，DNA 易位分析采用 Tophat2 和 Factera 1.4.3 完成；用 ExAC 和 ClinVar 數(shù)據(jù)庫分析、過濾，篩出高質(zhì)量的突變位點，采用 Sanger 測序法驗證突變位點。利用 SPSS19.0 軟件對FNMTC 和 SNMTC 兩組患者的突變比例、突變組和未突變組患者的臨床病理資料進行統(tǒng)計學分析，以 P＜0.05 作為差異有統(tǒng)計學意義。 結果： 結果： 1. 在基于二代測序的 FNMTC 易

7、感性檢測中，每個樣本的產(chǎn)生的總測序數(shù)據(jù)量約為 1.3~2.9 兆 （M） 測序讀段 （reads） ， 平均為 2.5M 測序讀段， 平均 98.9%的讀段在基因組，54.3%的讀段分布在二代測序的目標區(qū)域內(nèi)；對于 FNMTC 檢測的二代測序目標區(qū)域， 平均測序深度為 500× ， 最小和最大測序深度分別為 157×和 1505× ； 所有樣本中， 超過 96%的目標測序區(qū)域的平均測序深度大于 200