AMPK參與線粒體通路介導的氟致H9c2心肌細胞凋亡機制的研究.pdf

1、目的：
　　不同濃度氟化鈉（NaF）對H9c2心肌細胞進行染毒培養(yǎng)，研究AMPK參與線粒體通路介導的氟對H9c2心肌細胞毒性損傷的機理。
　　方法：
　　H9c2心肌細胞經不同濃度NaF作用48h和72h后，采用MTT法對細胞增殖進行研究；運用HE染色法觀察心肌細胞的形態(tài)變化；采用流式細胞術觀測氟對細胞線粒體膜電位（ΔΨm）和細胞早期凋亡率的影響；實時熒光定量PCR法檢測凋亡途徑（線粒體途徑）中的重要基因（caspas

2、e-3、caspase-9和Cyt c）以及AMPKα的mRNA表達量；Western blot法檢測AMPKα蛋白磷酸化表達水平。
　　結果：
　　實驗結果顯示，低劑量的氟對細胞的增殖沒有明顯影響，隨NaF濃度的逐漸增大，氟對細胞增殖的抑制作用逐漸增強，細胞形態(tài)呈現(xiàn)較明顯的變化，細胞間的相互連接逐漸消失，細胞膜變得模糊不清。在20 mg/L NaF作用下，細胞核開始發(fā)生碎裂，胞核中染色質聚集。在40mg/L NaF作用下，

3、細胞間連接幾乎完全喪失，細胞外觀形態(tài)扭曲，輪廓模糊；經NaF作用后，心肌細胞JC-1探針綠色熒光呈上升趨勢，說明氟會導致心肌細胞ΔΨm下降；細胞早期凋亡率隨NaF濃度的增大也呈上升趨勢，與ΔΨm的變化共同說明氟會導致H9c2心肌細胞發(fā)生凋亡；隨NaF劑量的增大，各實驗組caspase-3、caspase-9和Cyt c mRNA表達量與正常對照組比較均呈現(xiàn)上升趨勢；且心肌細胞AMPKαmRNA表達量逐漸增多；對照組心肌細胞p-AMPKα